Kit de teste de ELISA de ácido de castanho de rato

Kit de teste de ELISA de ácido de castanho de rato

Manual de instruções

Princípio de teste

Kit de teste de imunosorbenção ligada a biopsia de um passo com anticorpos duplos (Elisa).Para pré-embalagempor肉豆蔻酸（Myristicacido）O pacote de anticorpos é colocado em microporos, adicionando amostras, produtos padrão,Os anticorpos marcados por HRP são detectados, aquecidos e lavados. Colorado com o substrato TMB, o TMB é convertido em azul sob a catalisação da peroxidase e em amarelo final sob a ação do ácido. Luz de cor e amostra肉豆蔻酸（Myristicacido）apresentaçãoRelacionado. Usando enzimas emDetermine a absorção (OD) ao comprimento de onda de 450 nm e calcule a concentração da amostra.

Métodos de recolha, tratamento e conservação de amostras

1. soro: usar tubos de ensaio sem termogênios e endotoxinas, evitar qualquer estímulo celular durante a operação, depois de coletar sangue, 3000 centrifugação para separar rapidamente e cuidadosamente o soro e os glóbulos vermelhos durante 10 minutos.

Plasma: EDTA, citrato ou hepatina anticoagulante. 3.000 rotações centrífugas durante 30 minutos.

Liquido supercelular: 3.000 rotações centrífugas durante 10 minutos para remover partículas e polímeros.

Homogenização do tecido: adicione o tecido a uma quantidade adequada de água salina fisiológica. 3.000 rotações centrífugas durante 10 minutos.

Conservação: se a amostra não for detectada em tempo útil após a coleta, por favor, divide-a em uma única dose, congele-a a -20 ° C, evite o descongelamento repetido, descongela-a a temperatura ambiente e certifique-se de que a amostra seja descongelada uniformemente e completamente.

Artigos próprios

1. Marcadores enzimáticos (de 450 nm)

2. Amostradores e cabeças de alta precisão:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37 ° C termostato

Precauções operacionais

1. Caixa de teste conservada2-8 ° C, antes de usar o equilíbrio de temperatura ambiente por 20 minutos. O líquido de lavagem concentrado retirado do frigorífico terá cristalização, que é um fenômeno normal, aquecimento do banho de água faz com que o cristal se dissolva depois de ser usado novamente.

2. As placas não utilizadas no experimento devem ser imediatamente colocadas de volta no saco autofechado e seladas (secadas a baixa temperatura).

3. A concentração éO padrão S0 de 0 pode ser considerado um controle negativo ou um espaço em branco; A amostra foi diluída 5 vezes quando operada de acordo com as instruções, e o resultado final é multiplicado por 5 para a concentração real da amostra.

4. Operação de crescimento térmico de acordo com o tempo, a quantidade e a ordem indicadas nas instruções.

5. Agite bem todos os componentes líquidos antes de usar.

Composição do Kit

Nota: Produtos padrão (S0-S5) concentraçãoPara:0、50、100、200、400、800 pg / ml

Preparação dos Reagentes

20 x diluição do tampão de lavagem: a água destilada é diluída em 1: 20, ou seja, 1 porção de tampão de lavagem 20 x mais 19 porções de água destilada.

Método de lavagem

1. Lavagem manual: descarte o líquido dentro dos buracos, encha cada buraco com líquido de lavagem e deixe-o em posiçãoDepois de 1 minuto, descarte o líquido dentro do buraco e seque no papel de absorção de água para lavar a placa 5 vezes.

2. Máquina de lavar placas automática: injeção de lavagem por orifício350μL， Mergulhe por 1 minuto e lave a placa 5 vezes.

Passos de operação

1. Equilíbrio de temperatura ambienteDepois de 20 minutos, retire a placa necessária do saco de folha de alumínio e coloque a placa restante em 4 ° C com um saco selhado.

2. Defina orifícios padrão e orifícios de amostra, cada orifício padrão com diferentes concentrações de produtos padrão50 μL;

3. O buraco da amostra adiciona a amostra a ser testada primeiro10μL， Adicione 40 μL de diluição; Nenhum buraco em branco.

4. Além dos buracos em branco, a peroxidase de raiz moringa é adicionada a cada um dos buracos padrão e dos buracos da amostra (HRP) marcado com anticorpos de detecção de 100 μL, selar o furo de reação com uma membrana de vedação, 37 ° C banheiro de água ou termostático para 60 min.

5. Eliminar o líquido, absorver água e secar no papel, encher cada buraco com o líquido de lavagem, colocar1min， Elimine o líquido de lavagem, assorbe água no papel e seque, assim, repita a placa 5 vezes (também pode ser lavada com uma máquina de lavar placas).

6. Adiciona substância a cada buracoA, B cada 50 μL, incubar a luz a 37 ° C por 15 min.

7. Adicionar líquido terminante a cada buracoEm 50 μL, em 15 min, medir o valor de OD de cada orifício em um comprimento de onda de 450 nm.

Resultado do julgamento

Desenha curvas padrão: emNa folha de cálculo do Excel, a concentração do produto padrão como coordenadas transversais, o valor do OD correspondente como coordenadas longitudinais, desenhe a curva de regressão linear do produto padrão e calcule os valores de concentração da amostra de acordo com a equação da curva.
Kit de teste de ELISA de ácido de castanho de rato