Kit de teste de elastase elisa do peixe zebra

Kit de teste de elastase elisa do peixe zebraMétodos de pré-tratamento da amostra e precauções após o recebimento do kit, para referência:

Método de tratamento pré-amostra

Os diferentes tipos de amostras são tratados de forma diferente e devem ser operados de acordo com as instruções do kit. Aqui estão os pontos principais de processamento para os tipos de amostra comuns:

1. Soro / Plasma

• Recolha: coleta sangue usando EDTA ou hepatina anticoagulante sem indicadores de detecção para evitar hemolisis.
• Centrifugação: 2.000-3.000 x g, centrifugar a 4 ° C por 10-15 minutos para separar soro / plasma.
• Conservação: congelamento a -80 ° C após a partilha (para evitar o derretimento repetido), conservação a -20 ° C a curto prazo (detecção necessária o mais rápido possível).

2. Organização homogênea

• Extração: tecido fresco, água seca após lavagem com água salina fisiológica.
• Homoganização: Adicione PBS pré-refrigerado ou lisado (com inibidor de protease) por peso (g): volume (mL) = 1: 9-10 e deixe no gelo por 30 minutos após a homologação.
• Centrífuga: 12.000 x g, centrífuga a 4 ° C por 10-15 minutos, remover a limpeza.
• Conservação: no mesmo soro / plasma.

3. Liquido de fissão celular

• Coleta de células: lavar as células com PBS 2-3 vezes e descartar por centrifugação.
• Fixação: Adicionar uma lisa RIPA (contendo inibidores de protease), ultra-som quebrado ou repetida congelação.
• Centrífuga: 12.000 x g, centrífuga a 4 ° C por 20 minutos, remover a limpeza.
• Conservação: ibid.

4. Feces / outras amostras biológicas

• Pré-tratamento: as fezes devem ser absorvidas após a adição de solvente (por exemplo, mistura de cloroformo-metanol) para extrair os lípidos, após a centrifugação, a fase orgânica é secada e resolvida.
• Conservação: Evite a oxidação, recomenda-se a conservação a -80 ° C após a partilha.

Notas essenciais:

• Evite a poluição lipídica (por exemplo, quando a extração com cloroformo é necessária para remover os resíduos de solvente).
• As amostras podem conter proteínas ligadoras endógenas e devem garantir a fissura adequada.
• Evite congelamento repetido (é recomendado conservar em parcelas).

Tratamento após recepção da caixa

1. Verifique a integridade do kit:

   • Confirmação de reagentes, produtos de calibração, controles de qualidade, instruções e outros completos.
   • Verifique se as garrafas estão seladas e sem vazamentos ou camadas.

2. Condições de conservação:

   • Caixa não aberta: armazenar de acordo com as instruções (geralmente refrigerado a 2-8 ° C).
   • Reagentes abertos: uso a curto prazo pode ser armazenado em 2-8 ° C, a longo prazo precisa de -20 ° C de conservação (por exemplo, a placa de marcação enzimática precisa ser selada de folha de alumínio para evitar a luz).

3. Montagem e utilização:

   • Os produtos de calibração e controle de qualidade são recomendados para congelar após a partilha, para evitar o congelamento repetido.
   • O reagente deve ser reescaldado a temperatura ambiente (15-30 minutos) antes de ser usado para evitar mudanças abruptas de temperatura que afetem a reação.

4. Calibração e controle de qualidade:

   • Para criar curvas padrão, é necessário diluir o calibrado estritamente em gradiente de concentração.
   • Os resultados do controle de qualidade devem estar dentro do limite permitido, caso contrário, os problemas operacionais ou de reagentes devem ser resolvidos.

Perguntas e soluções frequentes

1. Valores de OD baixos ou elevados após o tratamento da amostra:

   • Verifique se a amostra está degradada (por exemplo, conservação inadequada leva à oxidação).
   • Verifique se o múltiplo de diluição da amostra é adequado (ajustamento além da faixa linear é necessário).

2. Anomalias de cor (como fundo alto e cor desigual):

   • Verifique se a adição do líquido terminante é excessiva ou insuficiente.
   • Verifique se o tempo de incubação e a temperatura estão em conformidade com os requisitos.

3. Curvas de calibração não ideais:

   • Verifique se o produto padrão está resolvido corretamente e se há contaminação.
   • Confirme a configuração do comprimento de onda do calibrador enzimático (geralmente 450 nm ± 10 nm).

4. Falha do Reagente:

   • Se o kit for mal conservado (por exemplo, congelamento repetido ou alta temperatura), o reagente pode falhar, recomenda-se contactar o fornecedor para a substituição.

Outras recomendações

• Pre-experimento pré-experimento otimizar as etapas de processamento de amostras (por exemplo, diferentes tecidos podem precisar ajustar as condições de fissura).
• Evite estritamente a contaminação cruzada (uso de cabeça de pistola de pipete especial, placas).
• Se os resultados forem anormais, recomenda-se a revisão ou contate o suporte técnico do fornecedor do kit.

Kit de teste de elastase elisa do peixe zebra
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