Kit de teste de dopamina (DA) elisa do peixe zebra Pesquisa científica

Kit de teste de dopamina (DA) elisa do peixe zebra Pesquisa científicaresumo das instruções operacionais padrão para referência. Por favor, baseie-se nas instruções da caixa de ensaio real.

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Preparação Antes do Experimento

1. Reagentes e materiais

   • Kit (com produtos padrão, anticorpos de detecção, placas enzimáticas, substâncias A/B, líquido de terminação, líquido de lavagem, membrana de vedação, etc.).
   • Amostras (soro, plasma, homoplasia de tecidos, etc.).
   • Termostato de 37 ℃, centrífuga, pipeta, lavadora de placas (ou lavadora manual), calibrador enzimático (comprimento de onda de 450 nm).

2. Tratamento de amostras

   • Soro / Plasma: separação centrífuga (3000 x g, 10 minutos), retirar o soro.
   • Homogenização do tecido: centrifugar após a homogeneização (5.000 x g, 10 minutos) e remover a limpeza.
   • As amostras devem ser evitadas para congelamento repetido, conservação a curto prazo de 4 ° C ou conservação a longo prazo de -80 ° C.

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II. Passos operacionais

1. Preparação padrão

• O pó congelado e seco padrão é resolvido com um líquido diluído e diluído de acordo com o gradiente do manual de instruções.

2. Adição de amostras

• Adicione uma amostra de 100 μL ou um produto padrão para cada buraco.
• Cubra a placa e incube a 37 ° C durante 90 minutos.

3. Lavagem

• Elimine o líquido dentro do poço, adicione 350 μL de líquido de lavagem a cada poço, deixe descansar após 30 segundos e repita 3 vezes. Seque o líquido residual.

4. Detecção de incubação de anticorpos

• Adicione 100 μL de fluido de trabalho de anticorpos biotinados a cada poço e incube a 37 ° C por 60 minutos.
• Lavar três vezes (passo 3).

5. Reação de cor

• Adicione 100 μL de composto enzimático (marcador HRP) a cada poço e incube à luz a 37 ° C por 30 minutos.
• Lave 5 vezes (chedi remover o líquido de lavagem).

Terminar Reações e Leituras

• Adicione 50 μL de terminante por orifício e, em 15 minutos, use um calibrador enzimático para medir o OD em um comprimento de onda de 450 nm.

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III. Resultado do cálculo

1. Desenha curvas padrão
   • Utilizando a concentração padrão como coordenada horizontal e o valor OD como coordenada longitudinal, encaixa-se com a curva padrão (modelo logístico de quatro parâmetros comumente usado).
2. Cálculo da concentração da amostra
   • Calcule a concentração de LPA com base no valor de OD da amostra substituído pela fórmula da curva padrão.

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IV. Atenção

1. Evite estritamente a poluição cruzada e substitua a cabeça durante a amostragem.
2. As etapas de lavagem requerem chedi para evitar sinais de impacto residual.
3. Os produtos padrão e os reagentes devem ser restaurados à temperatura ambiente depois de serem usados.
4. O líquido de terminação é corrosivo e é necessário usar luvas durante a operação.
5. Se o valor de OD for além da faixa da curva padrão, a proporção de diluição da amostra deve ser ajustada.

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