RiboNAT™ Kit de teste estéril rápido

RiboNAT ™ Kit de teste estéril rápido

No teste de segurança do medicamento injetável, o método de teste estéril prescrito pela farmacopédia multinacional deve ser cultivado por pelo menos 14 dias. No entanto, certos tratamentos celulares devem ser infundidos no paciente nos dias seguintes ao parto, o que dificulta a conclusão do teste estéril antes da administração, o que também leva à crescente necessidade de métodos de teste estéril que possam fornecer resultados mais rápidos para melhorar a segurança do paciente.

RiboNAT ™ É um kit de teste estéril rápido com tecnologia de amplificação de ácido nucleico (NAT) que pode completar o teste em apenas sete horas, reduzindo significativamente o tempo de teste em comparação com os métodos tradicionais. Ao contrário dos testes NAT tradicionais, que visam apenas o DNA genômico de micróbios, RiboNAT ™ O teste é o RNA ribosomal (rRNA). Como o rRNA é alto nos micróbios, isso torna a detecção mais sensível. Ao mesmo tempo, os métodos tradicionais são propensos a causar falsos positivos devido a DNA residual ou DNA contaminado no ambiente e materiais, enquanto o RiboNAT ™ Efetivamente reduz esse problema e melhora a precisão do teste.

◆ Características

Os resultados são obtidos no mesmo dia do teste (cerca de 7 horas)

Detecção por PCR RT-rt em tempo real (rRNA) com maior sensibilidade (9 CFU/mL) do que a detecção por gDNA

Redução dos falsos positivos causados ​​por DNA morto e residual

Detecção simultânea de várias bactérias (oxigênio e anaeróbico) e fungos

• Processo experimental

Especificações do kit de teste

◆ Composição do kit

• Detecção de sensibilidade

Figura 1. Sensibilidade de detecção

Para os seis tipos de microorganismos prescritos pela Farmacópea, foi preparada uma suspensão de microorganismos em concentração de 9 CFU / mL. Utilização do RiboNAT ™ Extrair o RNA dessas suspensões e detectar o RNA ribosomal (rRNA). O rRNA de todos os micróbios foi detectado com sucesso, com valores de Ct abaixo de 35.

Figura 2. Sensibilidade de detecção em amostras de suspensão celular

Para os seis micróbios prescritos pela Farmacópia, a suspensão de micróbios foi preparada em concentrações de 9 CFU / mL e com 0,25 x 10, respectivamente.⁶ células / ml de HEK293 mistura de células. Utilização do RiboNAT ™ Extrair o RNA da suspensão misturada e detectar o rRNA. O rRNA de todos os micróbios foi detectado com sucesso, com valores de Ct abaixo de 35.

Além disso, todas as seis cepas também foram detectadas nas seguintes condições (dados não mostrados):

Células-tronco mesoclámicas (MSC): 0,5 x 10⁶células/mL

· Célula T: 1,0 × 10⁶células/mL

• Métodos de detecção com maior sensibilidade

Concentração bacteriana: 2 CFU/mL

Tempo de incubação: 3-15 h

Figura 3. Métodos de detecção com maior sensibilidade

Para Aspergillus brasiliensis, Clostridium sporogenes e Cutibacterium acnes, a concentração foi2 UCFSuspensão microbiana. Embora o RiboNAT ™ O tempo de incubação é prescrito por um processo operacional regular de 3 horas, mas o experimento atrasou o tempo de incubação para 3-15 horas. Após a incubação, use o RiboNAT ™ Extrair o RNA e detectar o rRNA. Os resultados mostraram que três cepas, incluindo a bactéria estritamente anaeróbica (Bacillus sporaciae) e a bactéria de crescimento lento (Bacillus acne propionata), foram detectadas com sucesso após 14 horas ou mais de incubação, com valores de Ct abaixo de 35.

• Redução dos falsos positivos

RiboNAT ™ A inclusão de reagentes de ativação de DNA morta e etapas de processamento de DNase reduzem eficazmente o risco de falso positivo causado pelo DNA residual na amostra.

Figura 4. Redução dos falsos positivos

Usando PBS estéril comercializado como amostra de teste para o teste de ácido nucleico bacteriano (NAT). Um grupo de experimentos (Figura acima) utilizou kits comercializados para extrair DNA e, em seguida, realizar PCR quantitativa de fluorescência em tempo real direcionada a bactérias. Outro conjunto de experimentos (Figura abaixo), usando RiboNAT ™ O RNA é extraído e seguido por PCR quantitativa de retrotranscrição em tempo real. Seis curvas de amplificação foram observadas em uma abordagem baseada em DNA, enquanto o uso de RiboNAT ™ Nenhum sinal de amplificação foi detectado.

◆Lista de produtos