Serviços de Experimento Quantitativo de Marcadores Metabólicos SILAC

Serviços de Experimento Quantitativo de Marcadores Metabólicos SILAC

O princípio básico do SIL AC é substituir os aminoácidos correspondentes no meio de cultura celular por aminoácidos essenciais marcados por isótopos naturais (leves) ou isótopos estáveis (pesados), respectivamente. Após 5-6 ciclos de multiplicação, as células substituem os aminoácidos originais por aminoácidos marcados por isótopos estáveis * incorporados à proteína recém-sintetizada da célula. As proteínas fissadas de diferentes células marcadas são misturadas em proporções como o número de células ou a quantidade de proteínas, depois de isoladas, purificadas e quantificadas relativamente de acordo com a comparação de área de dois segmentos peptídicos isotópicos no espectrograma de massa de nível 1. Pertence ao método de marcação metabólica no corpo.

Processo de operação experimental:

Extração de proteínas e preparação de amostras

Teste de Eficiência da Marcação

3. mistura de amostras

Classificação SDS-PAGE

5, Enzima

6 Identificação espectral de massa

7 - Análise de software

Resultados Qualitativos Quantitativos do Proteoma

Extração de dados bioinformáticos e análise estatística

Observações experimentais:

Os clientes oferecem:

1- Extrato de proteína: Concentração > 1 μg / ul, quantidade total de proteína > 300 μg.

2, células: pela contagem celular, tomar não menos de 2x106 células em um tubo EP, adicionar 0 5ml de água salina ou protetor de proteína, depois de misturar e guardar no frigorífico (-80 ° C, para evitar o congelamento repetido).

Padrões de entrega:

Identificação de proteínas e resultados da análise quantitativa SIL AC;

2. orientação do clienteMapa do pico de massa correspondente à proteína;

3, passos experimentais completos do experimento SIL AC, uso de instrumentos, parâmetros de recuperação de software, etc.

Outros:

SILAC é a tecnologia de marcação in vivo, os aminoácidos marcados por isótopos estáveis ​​e as propriedades químicas dos aminoácidos naturais são basicamente idênticas, as células marcadas e as células não marcadas quase não têm diferença no comportamento biológico, a eficiência da marcação pode ser de até 100%.

2, a quantificação de espectro de massa, os resultados quantitativos são precisos e a variação de lote é pequena e repetitiva.

Marcadores metabólicos in vivo em combinação com SDS-PAGE ou tecnologia de separação cromatográfica, são compatíveis com proteínas hidrofóbicas e proteínas paraalcalinas, sem restrições das propriedades das proteínas.

Separação, corte enzimático e identificação simultâneas após a mistura de várias amostras, o efeito da experiência subsequente sobre a amostra é consistente, reduzindo o efeito da operação experimental e do equipamento instrumental.

Como a tecnologia pertence à marcação in vivo, o efeito de marcação é estável, sua eficiência de marcação não é afetada pelo lito, e é adequada não apenas para a análise de proteínas celulares inteiras, mas também para a identificação e quantificação de proteínas de membrana.

Em comparação com os marcadores químicos, a necessidade de proteína do método SIL AC é significativamente reduzida, geralmente apenas algumas dezenas de microgramas de proteína por amostra.

Marcadores vivos, mais próximos do estado real da amostra.

Apenas aplicável a células cultivadas em vivo, para amostras de tecido comumente usadas ​​em pesquisas biomédicas, amostras de líquidos corporais e outros não podem ser analisados, o custo de marcação para modelos animais é muito alto e não pode ser alcançado. Em comparação com a tecnologia de marcação in vitro, o SIL AC é um marcador in vitro com as seguintes vantagens técnicas:

1, alto fluxo, pode identificar e quantificar centenas a milhares de proteínas simultaneamente;

Quantitativo * & CertoReduzir as diferenças experimentais devido a diferentes preparações de amostras;

Ampla gama de quantificação linear;

4, maior sensibilidade, redução significativa da necessidade de proteína;

A marca é a tecnologia de marcação in vivo, mais próxima do estado real da amostra.

Serviços técnicos da SILAC

1, marcação de isótopos celulares;

Separação SDS-PAGE;

4, separação de fase líquida e análise espectroscópica de massa pós-corte por enzima pancreatica;

Recuperação de banco de dados e análise quantitativa de proteínas;

Análise bioinformática de proteínas diferenciais;

7) Apresentação de relatórios experimentais.

Relatório de Serviços Experimentais

Identificação de proteínas e resultados da análise quantitativa SIL AC;

2 – Orientação do clienteMapa do pico de massa correspondente à proteína;

3, passos experimentais completos do experimento SIL AC, uso de instrumentos, parâmetros de recuperação de software, etc.

Vantagens do serviço técnico

1, alta sensibilidade, baixo limite de detecção, pode detectar proteínas de baixa abundância;

Forte capacidade de separação e ampla gama de análise, o iITRAQ pode identificar a separação de qualquer tipo de proteína, incluindo proteínas de alto peso molecular, proteínas ácidas e alcalinas, proteínas de membrana e proteínas insolúveis;

3, alto fluxo: análise simultânea de oito amostras, melhorando o fluxo experimental, que pode ser analisado simultaneamente em vários pontos de tempo ou proteínas tratadas de forma diferente;

Resultados confiáveis: resultados de análise qualitativa e quantitativa mais confiáveis;

Alto grau de automação: a fase líquida e o espectro de massa são conectados, operação automatizada, velocidade rápida de análise e bom efeito de separação.

Experimento em serviço: