Kit de teste de espectrofotomia

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　Kit de teste de espectrofotomia：

O PDC, encontrado principalmente na levedura, é uma das enzimas chave para a fermentação do etanol, que cataliza a descarboxilização do ácido acetónico para a produção de acetaldeído.

Princípio de determinação:

PDC cataliza a descarboxilização do ácido acetónico para a geração de acetaldehido, adicionando etanol deshidrogenase (ADH) para catalisar ainda mais a redução do acetaldehido do NADH para a geração de etanol e NAD +; O NADH tem picos de absorção em 340 nm, enquanto o NAD + não. A atividade do PDC foi calculada medindo a taxa de queda de absorção de luz de 340 nm.

Instrumentos e suprimentos próprios:

Grinder, gelo, centrífuga de mesa, espectrofotômetro UV, vaso de quartzo de 1 ml, pistola de pipeta ajustável e vapor duplo.

Composição e formulação:

Liquido de extração: garrafa líquida de 100mL x 1, conservar a 4 ° C.

Reagente 1: garrafa líquida de 20 ml x 1, conservado a 4 ° C.

Reagente 2: pó x 1 garrafa, conservação à luz a 4 ℃. 1 ml de água destilada antes da administração; Conservar a -20 ° C após a partilha de reagentes incompletos, proibindo o congelamento repetido.

Reagente 3: pó x 1 garrafa, conservação à luz a 4 ℃. 1 ml de água destilada antes da administração; Conservar a -20 ° C após a partilha de reagentes incompletos, proibindo o congelamento repetido.

Reagente 4: pó x 1 garrafa, conservação à luz a 4 ℃. 1 ml de água destilada antes da administração; Conservar a -20 ° C após a partilha de reagentes incompletos, proibindo o congelamento repetido.

Folha de medição:

Fórmula de cálculo da atividade enzimática:

a. A fórmula de cálculo para medição com uma placa de quartzo de porcentagem é a seguinte:

(1) Calculando a concentração de proteína da amostra:

Definição da atividade enzimática: A quantidade enzimática necessária para catalisar a produção de 1nmol H2O2 por miligrama de histoproteína por minuto é uma unidade de atividade enzimática (U) a pH 7,2 e temperatura de 37 ° C.

Atividade DAO (nmol / min / mg prot) = × V contra total ÷ (V × Cpr) ÷ T = 18 × A460 ÷ Cpr

(2) De acordo com a qualidade da amostra:

Definição da atividade enzimática: A quantidade enzimática necessária para produzir 1 nmol de H2O2 por minuto por grama de tecido em pH 7,2 e temperatura de 37 ° C é definida como uma unidade de atividade enzimática.

Atividade DAO (nmol / min / g peso fresco) = × V contra total ÷ (V tipo ÷ V tipo total × W) ÷ T = 18 × A460 ÷ W

(3) Por número de células:

Definição da atividade enzimática: A quantidade enzimática necessária para produzir 1 nmol H2O2 por minuto por 104 células em pH 7,2 e temperatura de 37 ° C é definida como uma unidade de atividade enzimática.

Atividade DAO (nmol / min / 104cell) = × V contra total ÷ (V ÷ V ÷ total × número de células) ÷ T = 18 × A460 ÷ número de células

(4) Calculado pelo volume do líquido

Definição da atividade enzimática: A quantidade enzimática necessária para catalisar a produção de 1nmol H2O2 por minuto por ml de soro a pH 7,2 e temperatura de 37 ° C é definida como uma unidade de atividade enzimática.

Atividade DAO (nmol / min / mL) = × V contra total ÷ V amostra ÷ T = 18 × A460

ε: coeficiente de dissipação mmol de anisamina vizinha oxidativa: 7,5 L/mmol/cm; d: Diâmetro do vaso biserico, 1 cm; V contra-total: volume total da reação, 0,2 mL; V amostra: volume da amostra em reação, 0,05 mL; V amostra total: volume de líquido extraído adicionado, 1 mL; Cpr: concentração de proteína da amostra, mg/mL； W: massa da amostra, g; T: tempo de reação, 30min

b. A fórmula de cálculo medida com uma placa de 96 buracos é a seguinte:

(1) Calculando a concentração de proteína da amostra:

Definição da atividade enzimática: A quantidade enzimática necessária para catalisar a produção de 1nmol H2O2 por miligrama de histoproteína por minuto é uma unidade de atividade enzimática (U) a pH 7,2 e temperatura de 37 ° C.

Atividade DAO (nmol / min / mg prot) = × V contra total ÷ (V × Cpr) ÷ T = 36 × A460 ÷ Cpr

(2) De acordo com a qualidade da amostra:

Definição da atividade enzimática: A quantidade enzimática necessária para produzir 1 nmol de H2O2 por minuto por grama de tecido em pH 7,2 e temperatura de 37 ° C é definida como uma unidade de atividade enzimática.

Atividade DAO (nmol / min / g peso fresco) = × V contra total ÷ (V tipo ÷ V tipo total × W) ÷ T = 36 × A460 ÷ W

(3) Por número de células:

Definição da atividade enzimática: A quantidade enzimática necessária para produzir 1 nmol H2O2 por minuto por 104 células em pH 7,2 e temperatura de 37 ° C é definida como uma unidade de atividade enzimática.

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