Universal SYBR verde qPCR mistura

Condições de armazenamento

Conservação a longo prazo Por favor, mantenha-o em -20 ° C, a mistura pode ser armazenada de forma estável durante um mês em condições de proteção contra a luz de 4 ° C após a fusão, para evitar o congelamento repetido.

Componente do produto

Universal SYBR verde qPCR mistura

Perfil do produto

Universal SYBR verde qPCR misturaÉ o SYBR. ® O reagente de qPCR específico para a coloração quimérica Green I é uma pré-mistura 2x que contém todos os componentes de qPCR, exceto o precursor e as amostras de DNA, reduzindo as etapas operacionais, reduzindo o tempo de amostragem e reduzindo as chances de contaminação. Seu componente principal é a polimerase de DNA Taq de iniciação térmica modificada por anticorpos, combinada com um sistema de tampão cuidadosamente otimizado e um fator de promoção da reação de PCR, para que o produto tenha características de alta especificidade e eficiência de amplificação, inibindo eficazmente a amplificação não específica, para quantificar com precisão modelos de uma ampla gama de concentrações e obter resultados de qPCR estáveis e confiáveis. A pré-mistura contém corantes de correção genéricos e é compatível com a grande maioria dos dispositivos de qPCR, incluindo instrumentos que requerem correção ROX, geralmente sem a adição de corantes de correção adicionais durante o experimento.

Uso

1. Usar atenção

① devido à pré-mistura de corantes na mistura, o processo de preparação do sistema de conservação ou reação deve evitar a exposição à luz intensa;

② Antes de usar, misture suavemente para cima e para baixo, não misture com oscilação de vortex, para evitar a geração de excesso de bolhas;

② O Mix contém corante de correção universal, aplicável a todos os modelos, sem a necessidade de adicionar corantes adicionais.

Sistema de reação qPCR recomendado

A concentração final de precursor geralmente recomendada é de 0,2 μM e pode ser ajustada na faixa de 0,1 a 1 μM quando o efeito da reação é ruim;

b. A quantidade de amostragem do modelo recomendada é de 1 a 2 μl, se o tipo de modelo for o ADNc não diluído, a quantidade de adição do modelo não deve exceder 10% do sistema de reação total. Diferentes tipos de modelos de DNA contêm diferentes números de cópias de genes alvo e, se necessário, podem ser diluídos em gradiente para determinar a melhor quantidade de adição de modelos de DNA.

Procedimento de reação qPCR (pode ser ajustado adequadamente de acordo com o modelo)Universal SYBR verde qPCR mistura

Método de dois passos

Método de três passos

a. Configuração da temperatura de cozimento & extensão (cozimento) de acordo com o valor Tm do precursor; Se o segmento for expandido em menos de 200 bp, o tempo de recolha e extensão (extensão) pode ser definido para 15 sec; Além disso, as configurações do tempo de recolha e extensão (extensão) devem ser ajustadas de acordo com o tempo mínimo de coleta de dados necessário para o qPCR que você usa;

b. Diferentes procedimentos de captação de curva de fusão de instrumentos qPCR são diferentes, geralmente, o procedimento padrão de captação de curva de fusão do instrumento pode ser usado.

4. Otimização experimental

Se as condições de reação padrão são usadas para um desempenho de reação inadequado, é necessário otimizar as condições de reação, que podem ser realizadas em ambos os aspectos da concentração de precursor e do processo de amplificação:

① Ajuste da concentração

Quando a concentração final do precursor varia entre 0,1 e 1,0 μM, quanto menor a concentração do precursor, maior a especificidade da amplificação, mas a eficiência da amplificação diminui.

② Otimização do programa de expansão

É necessário melhorar a especificidade de amplificação, pode ser usado o processo de duas etapas ou aumentar a temperatura de cozimento; Para aumentar a eficiência da amplificação, você pode usar procedimentos de três etapas ou prolongar o tempo de extensão.

5. Princípios de design de introdutores

① O comprimento do produto de amplificação é recomendado para ser controlado entre 80 e 200 bp;

Comprimento de 18 a 25 bp;

A diferença entre o valor de Tm do precursor positivo e o precursor inverso não é superior a 1 ° C, o valor de Tm é melhor controlado em 58 ~ 62 ° C;

O teor de GC do precursor é controlado entre 40% e 60%;

A distribuição geral dos primeiros A, G, C e T deve ser o mais uniforme possível, evitando a estrutura contínua de T / C ou A / G (especialmente as extremidades 3');

A última base da extremidade 3' do precursor é preferivelmente G ou C;

Evitar sequências complementares dentro ou entre os primeiros;

Utilize a função NCBI BLAST para recuperar a especificidade do precursor confirmado.

Fundada em 2004, a Azaood é uma empresa americana que desenvolve e produz kits de purificação de enzimas, proteínas, ácidos nucleicos e células de alta qualidade para pesquisa em ciências da vida, diagnóstico e aplicações de biotecnologia.Lingdaopessoas; A Azood é um fabricante líder com certificação ISO 9001, capaz de atender a empresas que vão desde pesquisa até bioprocessamento em massa e aplicações e requisitos OEM.