Kit de Identificação de PCR de Colônia de Carreira T Universal Carreira de Princípio T4

NobeladeKit de Identificação de PCR de Colônia de Carreira T Universal Carreira de Princípio T4

Kit de identificação de PCR de colônia de veículo T universal

Número de catálogo:42015

Composição, armazenamento e estabilidade:

Armazenamento: -20 ° C.

Os parâmetros de um produto específico dependem dos parâmetros da descrição do produto recebida

Introdução do produto:

Identificação por PCR de colônia é o método mais rápido bian para identificar se houve clonação positiva (incluindo fragmentos inseridos) após a conexão de clonação de veículo T. No entanto, os kits de identificação de PCR de colônia disponíveis no mercado usam precursores específicos de veículos T, como T3, T7 ou SP6, e só podem ser usados ​​para identificar clones positivos ligados a um veículo T específico. Se diferentes veículos T são usados, é necessário comprar vários kits de identificação ao mesmo tempo, aumentando significativamente os custos de uso. A empresa usa um kit de identificação de PCR de colônia de veículo T universal desenvolvido com um precursor de veículo T universal, que pode ser usado para a identificação de clones positivos ligados a todos os veículos T comuns no mercado (incluindo a série pGEM, pUC, pBluescript). Além disso, a identificação de caixas de PCR de colônia com T3, T7 ou SP6 como precursor é muito curta a distância do precursor do local de inserção, portanto, ao identificar a inserção de segmentos de cerca de 100 bp ou menos, a faixa de dímero precursor de clones negativos e a faixa de amplificação de clones positivos são tão próximas que não podem ser diferenciadas. Muitas vezes, a faixa do dímero precursor é vista como uma faixa de amplificação positiva, causando falsos positivos. Pelo contrário, causam falsos negativos. Esta caixa de teste tem uma distância de pelo menos 150 bp do portador T universal quando o fragmento não é inserido, juntamente com o comprimento do fragmento inserido, pode ser claramente distinguido se a faixa expandida do fragmento é inserida ou a faixa expandida do dímero do portador. Evitar falsos positivos ou falsos negativos melhora significativamente a precisão.O sistema portátil de pré-mistura PCR MasterMix desenvolvido pela nossa empresa não requer que você adicione vários ingredientes, adicionando diretamente colônias individuais que precisam ser triadas, após cerca de 1 hora de reação de PCR e teste de eletróforese, você pode obter os resultados da identificação de colônias recombinantes.

Ampliação prevista:

Atenção:

1. Ao reorganizar a identificação de colônias, antes de escolher uma única colônia, deve ser marcado para facilitar o uso após a identificação.

2. Ao selecionar uma colônia, escolha uma única colônia e não escolha muitas bactérias para não afetar os resultados da PCR.

3. Ao definir o procedimento de PCR, determine o tempo de extensão de acordo com o tamanho do fragmento inserido. Se o tamanho do fragmento for inferior a 1 kb, o tempo de extensão pode ser de 30 a 45 segundos e, se o fragmento for mais longo, o tempo de extensão pode ser aumentado nessa proporção.

Passos operacionais (25)mlPor exemplo, os clientes podem usar 20mlsistema):

1. Prepare 1 x Taq MasterMix contendo o precursor de acordo com o sistema abaixo.

2.Depois de numerar a colônia no comprimido cultivado durante a noite, escolha uma parte da colônia única para adicionar o líquido de reação acima usando a cabeça de pistola esterilizada e misture para que a colônia se disperse completamente no líquido de reação.

Um tubo adicional de controle negativo sem colônia pode ser configurado para facilitar a análise dos resultados experimentais.

3.O tubo de PCR é colocado em um ciclómetro térmico para iniciar a reação sob as seguintes condições, as quais são recomendadas:

94 ℃ 10 minutos

94℃ 30 segundos

55℃ 30 segundos 30-33 ciclos

72 ℃ 0,5-1 min

72 ℃ 5 minutos

Observação: Ajuste o tempo de extensão de acordo com o tamanho do segmento inserido. O tempo de predição foi prolongado para 10 minutos, principalmente para romper a colônia e liberar o modelo de DNA.

Após a reação, pegue 5-10.ml Detecção de eletroforese direta.

NOTA: Se as bactérias são difíceis de fissurar ou as impurezas são falsamente negativas, tente o método abaixo, a fissura é realizada após a liberação do DNA.

1. Escolha a colônia para se juntar 50ml dd Água (ou 10)ml dd na água), agitar.

2. Ativar a enzima no líquido durante 99 graus e 10 minutos e liberar o DNA.

3. 12.000 rpm Centrífuga 1 minuto para remover os fragmentos celulares.

4. Remoção por PCR, 25mSistema de PCR 5mA partir de 50mágua) ou 1.m1) A partir de 10ml dd água) fazer um modelo.

Kit de Identificação de PCR de Colônia de Carreira T Universal Carreira de Princípio T4