Kit de teste de tirosinase (TyR) elisa de peixe zebra

Kit de teste de tirosinase (TyR) elisa de peixe zebraresumo das instruções operacionais padrão para referência. Por favor, baseie-se nas instruções da caixa de ensaio real.

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Preparação Antes do Experimento

1. Reagentes e materiais

   • Kit (com produtos padrão, anticorpos de detecção, placas enzimáticas, substâncias A/B, líquido de terminação, líquido de lavagem, membrana de vedação, etc.).
   • Amostras (soro, plasma, homoplasia de tecidos, etc.).
   • Termostato de 37 ℃, centrífuga, pipeta, lavadora de placas (ou lavadora manual), calibrador enzimático (comprimento de onda de 450 nm).

2. Tratamento de amostras

   • Soro / Plasma: separação centrífuga (3000 x g, 10 minutos), retirar o soro.
   • Homogenização do tecido: centrifugar após a homogeneização (5.000 x g, 10 minutos) e remover a limpeza.
   • As amostras devem ser evitadas para congelamento repetido, conservação a curto prazo de 4 ° C ou conservação a longo prazo de -80 ° C.

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II. Passos operacionais

1. Preparação padrão

• O pó congelado e seco padrão é resolvido com um líquido diluído e diluído de acordo com o gradiente do manual de instruções.

2. Adição de amostras

• Adicione uma amostra de 100 μL ou um produto padrão para cada buraco.
• Cubra a placa e incube a 37 ° C durante 90 minutos.

3. Lavagem

• Elimine o líquido dentro do poço, adicione 350 μL de líquido de lavagem a cada poço, deixe descansar após 30 segundos e repita 3 vezes. Seque o líquido residual.

4. Detecção de incubação de anticorpos

• Adicione 100 μL de fluido de trabalho de anticorpos biotinados a cada poço e incube a 37 ° C por 60 minutos.
• Lavar três vezes (passo 3).

5. Reação de cor

• Adicione 100 μL de composto enzimático (marcador HRP) a cada poço e incube à luz a 37 ° C por 30 minutos.
• Lave 5 vezes (chedi remover o líquido de lavagem).

Terminar Reações e Leituras

• Adicione 50 μL de terminante por orifício e, em 15 minutos, use um calibrador enzimático para medir o OD em um comprimento de onda de 450 nm.

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III. Resultado do cálculo

1. Desenha curvas padrão
   • Utilizando a concentração padrão como coordenada horizontal e o valor OD como coordenada longitudinal, encaixa-se com a curva padrão (modelo logístico de quatro parâmetros comumente usado).
2. Cálculo da concentração da amostra
   • Calcule a concentração de LPA com base no valor de OD da amostra substituído pela fórmula da curva padrão.

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IV. Atenção

1. Evite estritamente a poluição cruzada e substitua a cabeça durante a amostragem.
2. As etapas de lavagem requerem chedi para evitar sinais de impacto residual.
3. Os produtos padrão e os reagentes devem ser restaurados à temperatura ambiente depois de serem usados.
4. O líquido de terminação é corrosivo e é necessário usar luvas durante a operação.
5. Se o valor de OD for além da faixa da curva padrão, a proporção de diluição da amostra deve ser ajustada.

Kit de teste de tirosinase (TyR) elisa de peixe zebra
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