Contagem absoluta de microesferas de fluxo

NegociávelAtualização em05/06

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Microesferas de contagem absoluta de fluxo são agora amplamente usadas em experimentos de contagem celular e estudos de progressão da doença, especialmente no campo da pesquisa de células tronco.

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Contagem absoluta de microesferas de fluxo

Descrição do produto

Descrição

A análise da contagem celular por citologia de fluxo permite quantificar rapidamente as características das células, e as microesferas de contagem celular absoluta são agora amplamente usadas em experimentos de contagem celular e estudos de progressão da doença, especialmente no campo da pesquisa de células tronco. A embalagem única deste produto contém partículas fluorescentes tingidas com precisão com tintura fluorescente, com a melhor intensidade de fluorescência e um amplo espectro de emissão em múltiplos canais (FITC, PE, PE-Cy5). A superfície hidrófila das partículas elimina a produção de dímeros, garantindo a precisão das contagens verificadas pelo processo analítico, bem como a confiabilidade das contagens absolutas do citometro de fluxo.
A obtenção da contagem celular absoluta é geralmente feita por dois métodos, um combinando a concentração celular detectada em um instrumento de análise celular com os dados da população celular da análise da contagem celular por citologia de fluxo (detecção multi-plataforma) e o outro adicionando um padrão de contagem de microesferas interna à amostra de células de fluxo (detecção de plataforma única). O método de detecção de plataforma única é muito simples, evitando diferenças entre laboratórios, de modo que a contagem absoluta celular mais precisa e com referência fluorescente do que a microesfera é um dos métodos de contagem absoluta de plataforma única de fluxo amplamente reconhecidos pelos profissionais clínicos e científicos.

aplicação

Contagem absoluta de linfocitos T, contagem absoluta de células-tronco hematopoiéticas CD34+, contagem absoluta de glóbulos vermelhos reticulares, contagem absoluta de células tumorais circulantes, etc.

concentração

6.4x107partículas/ml ± 5%

Uso

Requisitos da amostra:
1, coletar amostras acima de 200uL com guan anticoagulante de hepatina.
As amostras devem ser armazenadas a temperatura ambiente e evitar vibrações, e usadas dentro de 24 horas após a coleta de sangue.
A amostra é mantida em 2-8 ° C após a coloração e testada em bordo dentro de 24 horas.
As amostras com contaminação microbiana, lipodemia, coagulação e má vitalidade celular devem ser evitadas, a menos que a amostra seja insubstituível, por favor, marque no relatório de resultados.

Materiais necessários:
1, hemosolvente para a divisão de células sanguíneas xij
2. Reagentes anticorpos de fluxo
3, hepatina anticoagulante guan
Gama de medição para pipetas de 20uL, 100uL, 1mL e aspiradores descartáveis
5 - Oscilladores de turbo
6, citométria de fluxo

Passos operacionais:
1, usando a tecnologia de pipeta inversa para absorver a amostra misturada de 50uL, adicionando a conta absoluta no fundo do guan, a frente do pipeta evita o contato com o fundo do tubo e evita que o sangue toque a parede superior do tubo.
2, adicionar uma certa quantidade de anticorpos de fluxo no fundo do tubo de fluxo.
3, tapar o chapéu do tubo, suavemente agitar e misturar por cerca de 3 segundos, a temperatura ambiente para evitar a luz durante 25 minutos.
Adicione 450 uL de células sanguíneas ao tubo com hemolisis ji, cubra a tampa do tubo, misture suavemente por cerca de 15 segundos e mantenha a temperatura ambiente durante 10 minutos. Sem lavagem, para verificação.
5, misture suavemente por cerca de 10 segundos para a detecção no avião.
O método de análise abaixo é demonstrado com amostras de sangue periférico adulto normal, CD3-FITC / CD8-PE / CD45-PerCP / CD4-APC monoclonal fluorescente kit (citometria de fluxo).
Em primeiro lugar, estabelecer um mapa de dispersão CD45 / SSC, com a população de linfocitos mostrando alta expressão de CD45 e baixa expressão de SSC, cercado com portas irregulares, ver Figura 1:

Figura 1: Círculo de portas de linfocitos no mapa de dispersão CD45/SSC

Em segundo lugar, escolha mostrar as células dentro da porta linfocítica e defina o mapa de dispersão CD3 / SSC. Círculo CD3 +, ver Figura 2.

Figura 2: Linfocitos CD3 + circulados no mapa de dispersão CD3 / SSC

Selecione mostrar as células dentro da porta de linfocitos e defina a porta quadrante quatro do gráfico de dispersão CD3 / CD4. Os linfocitos CD3 e CD4 são linfocitos CD4+T, ver Figura 3.

Figura 3: Diagrama de dispersão CD3/CD4 configura porta de quatro quadrantes

Finalmente, selecione Mostrar todas as células, definir o mapa de dispersão CD3 / CD8 e cercar a contagem absoluta de microesferas, ver Figura 4.

Figura 4: Gráfico de dispersão CD3/CD8 para a contagem absoluta de microesferas

Se o software automático de contagem absoluta não for usado, a contagem manual pode ser feita usando a seguinte equação:
Número absoluto de células linfáticas (células/uL) = (número de células linfáticas na região x valor marcado de microesferas) / (contagem absoluta de microesferas na região x volume da amostra)

Método de armazenamento/salvaguarda

Conservar a 2-30 ° C, nunca congelar, válido por 5 anos.

Indicadores técnicos

Ingredientes	Microesferas de poliestireno de coloração fluorescente múltipla
Tamanho da microesfera	5 um
cor	Fluorescença verde (488/525 nm)
	Fluorescença vermelha (535/575 nm)
	Infravermelho próximo (635/660 nm)
concentração	6.4×107partículas / ml ± 5%
Densidade	1,05 g/cm³
uniforme	CV em 3%
Aditivos	0,05% tween-20 dispersor / surfactante, conservante 2mM

Precauções

1 - Não congelar.
2, antes do uso de ultra-som 10S efeito zuijia.

Área de Pesquisa
Área de Pesquisa	Descoberta de drogasDroga de pequena moléculaDescoberta de compostos de chumbo

Contagem absoluta de microesferas de fluxoNOTA: Este produto é usado apenas para pesquisas científicas e não suporta estudos clínicos.

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