Kit de teste de fluorescenase NLuc

A fluorescenase NLuc é uma enzima molecular pequena geneticamente modificada (19,1 kDa) que é uma proteína de relatório de genes de bioluminescência com maior desempenho. É cerca de 150 vezes mais brilhante do que a luminosa (Photinus pyralis) ou a fluorescenase renal marinha e usa um novo análogo da furimazina para produzir sinais luminosos de alta intensidade. Essa reação luminescente não depende do ATP, enquanto obtém a maior sensibilidade de detecção inibindo o sinal luminescente subjacente.
O NLuc Reporter Gene Assay Kit fornece um reagente simples, aditível e de alta sensibilidade que produz sinais fortes na presença da fluorescenase NLuc.
Composição do produto:

1. materiais próprios:
PBS； Vários tiros; placas de cultura de células brancas opacas / pretas; Emissores químicos ou marcadores enzimáticos.
Preparação antes do teste:
(1) colocar pré-substrato de detecção NLuc (50 x) e tampão de substrato de detecção NLuc a temperatura ambiente.
(2) De acordo com o uso real, misture a quantidade apropriada de substrato de detecção NLuc (50 x) com o tampão de substrato de detecção NLuc em uma proporção de 1:50 e proteja-se da luz a temperatura ambiente. Por exemplo, se 10 ml de líquido de reação forem necessários, será necessário adicionar 0,2 ml de substrato de teste.
NOTA: Recomenda-se a utilização atual, o líquido de reação restante contendo o novo substrato não é recomendado para ser mantido após o fim do experimento.
3. Método de operação:
(1) Retire a placa de cultura celular da caixa de cultura celular, coloque 5-15 min e retorne à temperatura ambiente.
Nota: Use placas de cultura celular pretas ou brancas para reduzir a interferência do sinal entre os orifícios.
(2) Adicionar solução de teste
Adicione o líquido de reação que contém o subsídio equilibrado a temperatura ambiente em cada orifício celular usando uma escopeta múltipla, amostra o mesmo volume do líquido de cultura celular e misture. Por exemplo, uma placa de 96 buracos geralmente adiciona 80-100 μL de cultura e, de acordo, adiciona 80 μL-100 μL de solução de teste; A placa de 384 buracos geralmente adiciona 20-30 μL de cultura e, de acordo, adiciona 20-30 μL de solução de teste.
3) Detecção de luminosidade
Após a mistura, a atividade do gene relatada pela fluorescenase NLuc é detectada em um luminômetro químico ou em um marcador enzimático.
NOTA: Para obter os melhores resultados, conclua o teste dentro de 1 hora após a adição do reagente de teste.
4) Análise de dados:
(1) Desenho experimental: de acordo com os diferentes objetivos experimentais, o grupo de controle, o grupo experimental e o grupo de controle em branco devem ser definidos em cada placa de cultura. Para garantir a precisão do experimento, em teoria, cada grupo experimental (incluindo o grupo de controle) deve subtrair as medidas de luminosidade da fluorescenase de fogo-luzes do grupo de controle em branco.
Grupo de controle em branco:
Fundo F: células não transfectadas + líquido reativo.
NOTA: O volume de amostra do grupo de controle em branco deve ser o mesmo que o volume de amostra experimental, contendo a mesma combinação de meio / soro que a amostra experimental, com a adição do mesmo reagente de teste.
Grupo experimental: as células transfectadas são tratadas por compostos experimentais (ou seja, grupo experimental F).
Grupo de controle: as células transfectadas não foram tratadas para normalizar os resultados (ou seja, o grupo de controle F).
2) Resultado do cálculo:
Grupo Experimental = Grupo Experimental F - Fundo F.
Grupo de controle = Grupo de controle F - Fundo F.
Expressão múltiplo = grupo experimental / grupo de controle.

-20 ° C, válido por um ano. O substrato de detecção NLuc (50 x) é recomendado para ser mantido em parcelas de -80 ℃.

1, a reação enzimática é mais sensível à temperatura, é importante equilibrar todos os reagentes à temperatura ambiente (20-25 ° C) antes da amostra;
A placa de 96 buracos branca ou preta é necessária para a detecção. Se uma placa normal transparente de 96 buracos for usada, haverá interferência mútua entre os buracos vizinhos;
Instrumentos de detecção: os instrumentos que podem detectar luminosidade química são aplicáveis, mas devido à configuração e sensibilidade dos diferentes instrumentos, o valor do sinal de luz medido também será diferente;
Determinação do medidor de fluorescência de tubo único, após a mistura de cada amostra com o reagente de teste até o tempo anterior à determinação deve ser consistente;
Por sua própria segurança, faça uma proteção eficaz antes do experimento;