Kit de teste de vitalidade celular fluorescente 2D CTF-LTM

Existem vários métodos para a detecção da vitalidade celular, como a detecção da exclusão de corantes, mudanças na concentração de ATP, mudanças na atividade enzimática e muito mais. A detecção celular às vezes requer estudos mecânicos de citotoxicidade e / ou o estabelecimento de referências internas, o que resulta em uma necessidade de análise múltipla (multiplex), ou seja, a mesma amostra é detectada com vários métodos analíticos, com mecanismos de detecção diferentes e sem interferir uns com os outros, de modo a permitir comparações relevantes para revelar os mecanismos de citotoxicidade ou excluir diferenças sistêmicas. Os produtos CellTiter Fluor (CTF) estrangeiros são projetados com base nesse princípio. A empresa desenvolveu e lançou o Kit de Ensaio de Viabilidade de Células Fluorescentes (Fluorescent Cell Viability Assay Kit) semelhante, sem diferenças significativas de desempenho com os produtos de marcas estrangeiras. Este produto é baseado na degradação de produtos de substrato de grupo polipéptido-fluorescente por proteases dentro de células vivas para gerar sinais fluorescentes. Quando a integridade da membrana celular é danificada, a protease perde a atividade de degradação do substrato e não produz sinais fluorescentes. CTF-LTMAo contrário do princípio de detecção do kit de fluorescenase, o método de detecção também é diferente, sua sensibilidade de detecção é segunda ao método de fluorescenase, mas pode detectar danos celulares leves mais cedo, os dois testes são bem compatíveis e podem ser realizados testes multiplex.
Características do produto:
1, Desempenho
detecção de sinais, Window， A sensibilidade e a especificidade são semelhantes aos produtos semelhantes de marcas estrangeiras.
2、 相容性
É compatível com reagentes analíticos comuns, como CTG, sem interações.
3. Características
É mais sensível à lesão da membrana celular precoce.
4 – Facilidade
"Adição - mistura - teste", toda a etapa experimental é simples e fácil de operar.
Composição do produto:
Substrato protease, misturado com tampão, preenchido em garrafas marrons de 10 ml ou 100 ml e tubos de 2 ml, com as seguintes especificações:

1 Preparação das células:
(1) colocar a densidade adequada das células a serem detectadas em placas de cultura celular de 96 ou 384 poços. Recomenda-se o uso de um quadro preto (por exemplo, em combinação com um reagente luminescente, o quadro branco pode ser escolhido).
2) Preparar os compostos para teste. Adicione a concentração apropriada do composto a ser detectado ao orifício da placa celular. A concentração de solventes orgânicos no líquido de cultura é mantida abaixo de 1 a 2%. Crie um grupo de controle de compostos não adicionados. Continue treinando o tempo adequado de acordo com as necessidades do projeto.
Teste de vitalidade celular:
Retirar o CTF-LTMO reagente de teste de vitalidade celular, tampão CTF wan totalmente dissolvido e equilibrado a temperatura ambiente. A oscilação turbulenta do substrato CTF mistura o seu fundo C, coletando instantaneamente o substrato CTF para o fundo do tubo.
(2) Preparação do líquido reativo CTF: o substrato CTF é 100x, de acordo com a quantidade de tampão CTF para 1x líquido reativo, misturado completamente.
(3) Retire a placa de cultura celular a ser testada e adicione o mesmo volume de líquido de reação CTF a cada poço, por exemplo, 100 μl de líquido de cultura para adicionar 100 μl de líquido de reação CTF 1x.
(4) A placa de baixa velocidade é misturada por 20 segundos e a detecção de fluorescência é realizada após 60 minutos de reação a 37 ° C. Diferentes células têm velocidades diferentes de corte do substrato CTF e o tempo de leitura óptimo da placa deve ser otimizado de acordo com a célula. A leitura da placa pode ser feita no máximo 30 minutos após a adição do reagente. Geralmente, após 60 minutos ou mais, a leitura da placa resulta em maior relação de sinal e ruído. Recomenda-se que o tempo de leitura não exceda 3 horas.
(5) Leitura do sinal fluorescente no leitor de placa fluorescente, excitação da luz Ex 380-400nm, emissão de luz Em 505nm.
(6) Continuar a realizar múltiplas análises downstream, como teste de apoptose Caspases 3/7, conforme necessário.

1, após o uso inicial, recomenda-se que o subsídio seja dividido em -20 ° C para ser mantido e cada vez que o líquido de reação seja preparado fresco.
Sem rigorosa verificação, não é recomendado alterar arbitrariamente a dose de reagente de reação.

-20 ° C e abaixo para armazenamento à luz, válido por 12 meses.