Kit de teste de atividade da sintase de amido ligado Método de microquantificação

Kit de teste de atividade da sintase de amido ligado Método de microquantificação

Nota: É necessário antes da avaliação oficial.2-3Uma amostra com maior diferença de expectativa para a previsão.

Número da mercadoria：BC3295

Especificações:100T/96S

Conteúdo do produto:

Liquido de extração：100 ml x 1 garrafa de líquido, conservação a 4 ° C;

Reagente 1: garrafa de 30mL x 1, conservação a 4 ° C;

Reagente 2: pó x 1 garrafa, conservação a 4 ° C;

Reagente 3: pó x 1 garrafa, -20 ° C conservação;

Reagente 4: pó x 2 garrafas, conservação a 4 ° C; Adicionar 5 ml de reagente para uma mistura completa antes da administração;

Reagente 5: pó x 1 garrafa, conservação a 4 ° C; Adicionar 10 ml de reagente antes da administração para uma mistura adequada de reposição;

Reagente 6: pó x 1 peça, -20 ° C conservação; Adicionar 500 μL de vapor duplo antes da administração clínica para dissolver completamente o repositório;

Reagentes sete: líquido 250 μL x 2 comprimidos, -20 ° C conservação;

Reagente 8: líquido 12,5 μL x 2 comprimidos; Adicione 4 ml de reagente dissolvido antes de cada uso.

Liquido de ReaçãoⅠPreparação:Antes da administração, adicione 14 mL de reagente I no reagente II, aqueça lentamente, aqueça gradualmente para dissolvê-lo, depois de resfriar, adicione-o ao reagente III para dissolvê-lo. Isso pode ser preparado e medido em dois lotes.

Descrição do produto:

GBSS (EC 2.4.1.21) está presente no amido em estado de ligação, catalisando a reação de alongamento da cadeia de amido, responsável principalmente pela síntese do amido de cadeia reta.

O GBSS cataliza a reação do ADPG com o precursor do amido (poliglicose), transferindo as moléculas de glicose para o precursor do amido, ao mesmo tempo que gera o ADP; Além disso, a NADP é catalisada sequencialmente pela adição de acetoquinase, hexacoquinase e 6-fosfato-glucose desidratase ao sistema de reação.⁺Reduzido a NADPH, onde a geração de NADPH é proporcional à quantidade de ADP gerada pela reação anterior, a atividade GBSS pode ser calculada medindo o aumento de NADPH a 340 nm.

Instrumentos e equipamentos necessários:

Espectrofotômetro UV/calibrador enzimático, panela de banho de água, centrífuga de mesa, pipeta ajustável, placa de quartzo/placa de 96 buracos (placa UV), molho, gelo e água destilada.

Passos operacionais:

I. Preparação de líquido enzimático

Pese cerca de 0,1 g de tecido e adicione 1 ml de extrato e homogeneize no banho de gelo. 10000g ， 4 ℃ centrífuga 10min, descartar a limpeza, adicionar 1mL de extração na precipitação e misturar completamente, colocar no gelo para teste.

II. Etapas de medição

1, espectrofotômetro ou calibrador enzimático pré-aquecimento de mais de 30 minutos, ajustar o comprimento de onda 340nm, água destilada zero.

2, adicionar os seguintes reagentes no tubo EP em ordem

Imediatamente após a mistura, transferir 200μL de traços de quartzo em um vaso de quartzo ou uma placa de 96 buracos, registrar a absorção inicial A1 sob 340 nm comprimento de onda e a absorção A2 após 2min, calculando ΔA = A2-A1.

Atenção:O reagente 2, se houver precipitação, deve ser completamente dissolvido antes de ser adicionado.

Três.GBSSCálculo de Atividade

a.A fórmula de cálculo para medição com uma placa de quartzo em traços é a seguinte:

Calcular a concentração de proteína da amostra:

Definição de unidade: 1 nmol de NADPH é definido como uma unidade de vitalidade enzimática por cada mg de histoproteína catalizada por minuto em um sistema de reação de 1mL.

Atividade GBSS (U / mg prot) = [ΔA ÷ (ε × d) × V medição] ÷ (Cpr × V como ÷ V contra total × V superior) ÷T = 432 × ΔA ÷ Cpr

Este método requer a própria determinação da concentração de proteína da amostra.

2- Calcular de acordo com o peso da amostra

Definição de unidade: 1 nmol de NADPH é definido como uma unidade de vitalidade enzimática por g de tecido em um sistema de reação de 1 mL por minuto catalizado.

Atividade GBSS (U / g peso fresco) = [ΔA ÷ (ε × d) × V x 10⁹] ÷ (W ÷ V extração × V como ÷ V contra total × V superior) ÷ T = 432 × ΔA ÷ W.

V: volume de medição, 0,26 m L; V amostra: adição de volume de amostra, 0,1 m L; V contra-total: volume de reação, 0,31 mL; V superlíquido: adicionar o volume de líquido superlíquido, 0,15 mL; V extração: adicionar o volume de líquido extraído, 1 x 10^-3L;ε: coeficiente molar de dissipação NADPH, 6,22 x 10^-3mL/nmoL/cm； d: Diâmetro do vaso biserico, 1 cm; T: tempo de reação, 2 min; Cpr: concentração de proteína da amostra, mg/mL； W: qualidade da amostra, g。

b.usar96A fórmula de cálculo para a medição da placa é a seguinte:

Calcular a concentração de proteína da amostra:

Definição de unidade: 1 nmol de NADPH é definido como uma unidade de vitalidade enzimática por mg de histoproteína catalizada por minuto no sistema de reação.

Atividade GBSS (U / mg prot) = [ΔA ÷ (ε × d) × V medição] ÷ (Cpr × V como ÷ V contra total × V superior) ÷ T = 720 × ΔA ÷ Cpr.

Este método requer a própria determinação da concentração de proteína da amostra.

2- Calcular de acordo com o peso da amostra

Definição de unidade: 1 nmol de NADPH por g de tecido catalizado por minuto no sistema de reação é definido como uma unidade de vitalidade enzimática.

Atividade GBSS (U / g peso fresco) = [ΔA ÷ (ε × d) × V medição] ÷ (W ÷ V extração × V modelo ÷ V contra total × V superior) ÷ T = 720 × ΔA ÷ W.

V: volume de medição, 0,26 m L; V amostra: adição de volume de amostra, 0,1 m L; V contra-total: volume de reação, 0,31 mL; V superlíquido: adicionar o volume de líquido superlíquido, 0,15 mL; V extração: adicionar o volume de líquido extraído, 1 x 10^-3L;ε: coeficiente molar de dissipação NADPH, 6,22 x 10^-3mL/nmoL/cm； d: Diâmetro do vaso biserico, 1 cm; T: tempo de reação, 2 min; Cpr: concentração de proteína da amostra, mg/mL； W: qualidade da amostra, g。

Kit de teste de atividade da sintase de amido ligado Método de microquantificaçãoInstruções de encomenda:

A grande maioria dos produtos estão em stock, em geral, podem ser encomendados no mesmo dia de envio.
Alguns produtos muito usados ​​precisam ser reservados com 1-2 dias de antecedência e futuros no exterior precisam ser reservados com 3-6 semanas de antecedência.
Os preços de alguns produtos podem mudar devido ao período de entrega, lote e outros fatores, se houver mudança, o novo preço no dia do pedido será aplicado.
O prazo para pedidos diários é das 16h, algumas cidades podem chegar às 17h, devido ao excedimento do prazo, os que não podem enviar no dia seguinte serão enviados no dia seguinte.
5, por favor, depois de concluir o pagamento, comunique-nos com o endereço do destinatário, nome, etc. por fax, mensagem de texto, etc.

Instruções de transporte:

Produtos de extrema baixa temperatura: o transporte de gelo seco durante o transporte de produtos de extrema baixa temperatura. Envolva o produto com gelo seco, sela a caixa de espuma, pegue a caixa de espuma em camadas de fita, coloque-a na caixa da Solebar e entregue-a à cooperação expressa, segura, rápida e eficiente e segura nas mãos dos clientes, garantindo a estabilidade do produto e acompanhando seu experimento.
Produtos a baixa temperatura: Sacos de gelo da Soleibol são adicionados durante o transporte de produtos a baixa temperatura. Envolver o produto com um saco de gelo, selar a caixa de espuma, selar a caixa de espuma com fita, colocar a caixa da Solebar (o efeito de isolamento pode durar menos de uma semana), em seguida, entregar para a cooperação expressa, segura, rápida e eficiente e segura para as mãos dos clientes, garantir a estabilidade da natureza do produto e acompanhar o seu experimento.
Produtos a temperatura normal: o transporte de produtos a temperatura normal não requer gelo ou embalagens especiais. Os produtos são distribuídos rapidamente pelo pessoal de armazém da empresa, e a entrega rápida e eficiente garante a entrega rápida dos produtos em suas mãos.