Kit de teste de atividade da alfa-cetopropentato deshidrogenase

α-Deshidrogenase de cetonopentato (α-KGDHInstruções do kit de teste de atividade
Método Micrométrico
NOTA: O reagente deste produto foi alterado, por favor note e siga estritamente as instruções.
Número da mercadoria：BC0715
especificação：100T/96S
Composição do produto: verifique cuidadosamente se o volume do reagente é consistente com o volume dentro da garrafa antes de usar, por favor, entre em contato com a equipe da Solebar em tempo útil.

Formulação da solução:

1. Reagente 2: para o reagente volátil, selado o mais rápido possível após o uso, -20 ° C conservação;

2. Reagente 5: Tome um reagente 5 antes da administração, adicione1mL de reagente 3, totalmente dissolvido, reagente sem fim2-8℃guardar4Semana;

3. Reagente 6: 1 Reagente 6 antes da administração, adicionar1.5mL de reagente 3, totalmente dissolvido, reagente sem fim-20°C conservação4Semanas para evitar congelamento repetido;

4. Reagente 7: Tome um Reagente 7 antes da administração, adicione1mL de reagente 3, totalmente dissolvido, reagente sem fim-20°C conservação4Semanas, evitar congelamento repetido (1 pó pode ser feito após a dissolução100TPara prolongar a duração deste produto1pó);

5. Reagente oito: tomar um reagente oito antes da administração, adicionar0,4 mlÁgua destilada, totalmente dissolvida, reagentes inexhaustíveis-20℃Salvar a partilha4Semanas para evitar congelamento repetido;

6. Preparação do líquido de trabalho: 8.05ml de reagente 3.0.2 em mLReagentes 4, 1em mLReagentes 5, 1,25em mLReagentes 6, 0,5em mLReagentes 7.(Total)11em mLAproximadamente.55T）totalmente misturado, já disponível.

Descrição do produto:
α-KGDH（EC 1.2.4.2Amplamente presente em micróbios de animais, plantas e mitocondrias de células cultivadas, é uma das enzimas-chave que regulam a circulação do tricarboxílico, catalisandoα-Descarboxilização do óxido de cetonapentato para a geração de ambaril*A。
α-KGDHCatáliseα-Ácido cetonéptico,NAD⁺Co-auxiliar * A gerar Amber Co-auxiliar *Ao dióxido de carbono eNADH，NADHEm340 nmTem picos de absorção característicos paraNADHTaxa de geraçãoα-KGDHAtividade.

Nota: Antes do experimento é recomendado selecionar 2-3 amostras com grandes diferenças esperadas para pré-experimento. Se o valor de absorção da amostra não estiver dentro da faixa de medição, recomenda-se diluir ou aumentar o volume da amostra.
Instrumentos e equipamentos necessários:
Espectrofotômetro UV/calibrador enzimático, panela de banho de água/Cámara de cultivo termostática, centrífuga de mesa, pipeta ajustável, vaso de quartzo/96BuracoUVPlaca, fundo/Absorbente, gelo e água destilada.
Passos operacionais:Detalhes sobre as etapas operacionais podem ser encontrados no anexo "Perfil do produto"

1. Todos os reagentes e amostras são colocados no gelo durante a medição para evitar a degeneração e a inativação.

2. A temperatura do líquido de reação no vaso de biserico deve ser mantida a 37 ° C ou25℃Pegue um copo com uma quantidade determinada.37℃ou25℃Água destilada, coloque este copo no37℃ou25℃na panela de banho. Coloque o prato de biserico junto com o líquido de reação neste copo durante a reação.

3. É melhor que duas pessoas façam o experimento ao mesmo tempo, uma pessoa comparando as cores e uma pessoa cronometrando para garantir a precisão dos resultados do experimento.

4. Tubo de mediçãoΔAValor em0.01-0.25Entre, se o tubo for determinadoΔAValor maior que0.25É necessário diluir a amostra.

5. Como o extrato contém uma certa concentração de proteína (cerca de 1 mg / mL), é necessário subtrair o conteúdo de proteína do próprio extrato ao medir a concentração de proteína da amostra.

Exemplos experimentais:

1. Pegue 0,1 g de grama para processamento de amostrasDepois de ser diluído duas vezes.Seguir as etapas de medição, usando uma placa de quartzo em traçoscálculoΔADeterminação=A4-A3=0.3243-0.3115=0.0128，ΔAEspaço=A2-A1=0，A enzima vive por massa da amostra:

α-KGDHAtividade(U/g de massa)= 1488,5×(ΔA)DeterminaçãoO ΔAEspaço÷W×2(múltiplos de diluição)=381.056 U/gQualidade.

1. Pegue 0,1 g de fígado de rato para processamento de amostras,4 ℃ 11000g Centrífuga10 minutosTire depois.Seguir as etapas de medição, usando uma placa de quartzo em traçoscálculoΔADeterminação=A4-A3=1.2123-0.9623=0.2500，ΔAEspaço=A2-A1=0，A enzima vive por massa da amostra:

α-KGDHAtividade(U/g de massa)= 1488,5×(ΔA)DeterminaçãoO ΔAEspaço÷W = 3721,25 U/gQualidade.
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Referências:
Park L C H, Calingasan N Y, Sheu K F R, et al. Quantitative α-cetoglutarato desidrogenase atividade coloração em seções do cérebro e em células cultivadas [J]. Bioquímica analítica, 2000, 277(1): 86-93.
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