Células humanas de câncer de estômago ECC10

Células humanas de câncer de estômagoECC10

Introdução:Linhas celulares humanas derivadas do câncer de estômago (câncer de células pequenas). A creatinina quinase que expressa isoenzimas cerebrais.

Número do artigo：WS-S1438

especificação：1×106 garrafas de cultura de células/T25

Informações básicas das células

Fonte das células: estômago

- Morfologia celular: linfocito-tipo, crescimento suspenso

- Conteúdo celular: > 1 x 106 células / garrafa

- Especificações da embalagem: garrafa de cultura T25 / tubo de congelamento de 1mL

- Uso do produto: somente para uso científico,Não pode ser usado como um produto terapêutico para doenças animais ou humanas.

Médio e condições de cultivo

1. Meio de cultivo

RPMI1640 meio de cultura; 10% de soro bovino fetal; 1% dupla resistência

Soro recomendado:WinSera FBS500 - WP-002

2. Condições de cultivo

- Fase gás: 95% ar + 5% CO2 Temperatura: 37 ° C; Umidade: 70% - 80%

3. Congelação e armazenamento

Liquido congelado: 90% soro fetal bovino + 10% DMSO (disponível agora)

Condições de armazenamento: conservação de nitrogênio líquido a longo prazo

Formas de transporte e recepção

1. Envio a temperatura normal (T25 garrafa de células vivas)

Depois de receber as células, primeiro. T25 Cultivar corpo da garrafa para desinfecção superficial; Coloque a garrafa no recipiente por 2 a 3 horas; Observar a densidade celular e o estado de crescimento, tirar 2-3 fotos claras para feedback para vendas; Quando a densidade celular é atingida, a proporção de transmissão precoce é recomendada de 1:2; Quando as células voltarem a crescer, congele uma garrafa inteira de células em um tubo de congelamento de 1 ml e a outra garrafa continua a transmitir; Recomenda-se congelar repetidamente 2-3 células de semente e fazer um experimento de amplificação para evitar a ruptura celular devido a situações súbitas.

Nota: o meio de cultura para transporte (meio de irrigação) não pode mais ser usado para cultivar células, por favor, substitua o meio de cultura recém-formulado de acordo com as condições de cultura celular do manual de instruções para cultivar células. Receber sugestões de transmissão posterior de células A garrafa de cultura T25 é transmitida em 1:2.

2. Envio de gelo seco (células tubulares congeladas)

Envios regulares são 2 tubos de congelamento, recomenda-se recuperar 1 e manter 1 de reserva; Se a recuperação falhar, operar a segunda de acordo com o processo de recuperação padrão do fabricante; Se ambas as recuperações falharem, guarde imediatamente uma foto de todo o processo de recuperação e notifique as vendas a tempo.

Etapas da cultura celular

Recuperação de células congeladas

- Coloque um tubo de congelamento de 1mL de suspensão celular em banho de água a 37 ° C e agite rapidamente até descongelar;

- Adicionar um tubo centrífugo contendo 4 - 6mL de meio de cultura e misturar suavemente;

- 1000RPM Centrifugar por 3 - 5 minutos e descartar o líquido superior;

- Resuspender as células com o meio de cultura, vacinando em frascos / pratos de cultura contendo 6 - 8mL de meio de cultura;

Cultivar a 37 ° C durante a noite e observar o estado e a densidade do crescimento celular no microscópio no dia seguinte.

Para a transmissão celular de parede adherente, você pode fazer referência aos seguintes métodos: (densidade celular 80% - 90% transmissível)

- Eliminar a cultura e lavar as células 1 a 2 vezes com PBS sem íons de cálcio e magnésio.

- Adicionar 0,25% (w / v) yi Protease - 0,53 mM EDTA em garrafas de cultura (garrafas T25 1 - 2 mL, garrafas T75 2 - 3 mL), colocar em uma caixa de cultura a 37 ° C para digerir por 1 - 2 minutos (as células difíceis de digerir podem prolongar adequadamente o tempo de digestão), em seguida, observar a digestão celular sob o microscópio, se a maioria das células se arredondar e cair, rapidamente recuperar a mesa de operação, bater alguns toques na garrafa e adicionar 3 - 4 ml de meio contendo 10% FBS para terminar a digestão.

- Subir suavemente, centrifugar 3-5min em 1000RPM, descartar o líquido superior, adicionar 1-2mL de líquido de cultura e soprar bem. Divida a suspensão celular em uma proporção de 1:2 em uma nova garrafa T25, adicione 6 a 8 ml de novo meio de cultura configurado de acordo com as instruções para manter a vitalidade do crescimento das células, e a transmissão subsequente é realizada em uma proporção de 1:2 a 1:5 de acordo com as circunstâncias reais.

Para as células suspensas, a transmissão pode ser feita com referência aos seguintes métodos:

- Nota: a proporção de transmissão recomendada para a geração seguinte é de 1:2, e a proporção de transmissão posterior pode ser determinada por conta própria de acordo com as necessidades do cliente.

- Método 1: Coletar as células, centrifugar durante 4 minutos em 1000 RPM, descartar o supernatante, adicionar 1 - 2 ml de cultura e soprar bem, dividir a suspensão celular em uma proporção de 1: 2 a 1: 5 em um novo prato ou garrafa com 8 ml de meio de cultura.

- Método 2: Pode escolher a metade do método de troca de líquido, depois de descartar metade do meio de cultura, suspender as células restantes e dividir a suspensão celular na proporção de 1: 2 a 1: 3 em um novo prato ou garrafa com 8 ml de meio de cultura.

Congelação celular: após a recepção das células, é recomendado congelar um lote de sementes celulares nas primeiras 3 gerações para uso experimental posterior.

V. Precauções de Biosegurança

Todas as células animais são consideradas potencialmente biológicamente perigosas e devem ser operadas dentro de um gabinete de biossegurança de nível R para proteção pessoal; Todos os resíduos e vasos em contato com as células devem ser esterilizados antes de serem descartados.

2. Quando recuperar células congeladas, é importante usar luvas de proteção, máscaras de proteção FU e anti-HU; O tubo de congelamento mergulhado no nitrogênio líquido pode ocorrer vazamento e encher nitrogênio líquido, quando descongelado, a gasificação do nitrogênio líquido pode causar a explosão do recipiente, o colapso da tampa da garrafa causando arranhões e outros danos.