Células de glioma humano U373

Células de glioma humanoU373

Introdução:Linha celular problemática: mal identificada/contaminada. É um derivado do U-251MG. Esta linhagem celular não é a linhagem celular original do astrocitoma estabelecida em 1973 na Universidade de Uppsala. Ver U-373MG Uppsala (Cellosaurus=CVCL_2818) para a linha celular original de U-373MG.

Número da mercadoria：O WS-S1465

especificação：1×106 garrafas de cultura de células/T25

Informações básicas das células

Fonte das células: cérebro

- Morfologia celular: epitelial, crescimento de parede

- Conteúdo celular: > 1 x 106 células / garrafa

- Especificações da embalagem: garrafa de cultura T25 / tubo de congelamento de 1mL

- Uso do produto: somente para uso científico,Não pode ser usado como um produto terapêutico para doenças animais ou humanas.

Dois. Regras de processamento de células de temperatura normal no dia de recepção

Passo: Recepção e verificação

Passos 1 e 2 da parte executiva (processo geral).

2º passo: substituir o meio de cultura com a coleta de células

Atrás da garrafa de desinfecção, abra a tampa na mesa de trabalho ultra-limpa.

• Substituir o meio de cultivo fornecido com a mercadoria.

· Nota especial: se houver mais suspensão celular no microscópio, todos os meios na garrafa devem ser transferidos para uma centrifugadora estéril, centrifugação (por exemplo, 1200 rpm, 5min) para recolher as células e descartar os meios antigos.

Após a substituição ou recolha, coloque a garrafa em uma caixa de cultivo e permaneça em reposição por 2-3 horas.

3ª etapa: pós-reposição (dependendo da densidade celular)

Três. Etapas de operação de transmissão celular

A. Transmissão celular

Preparação: Absorber o meio antigo.

Lavagem: ao longo da parede lateral da garrafa de cultura, adicionar lentamente líquido de lavagem como PBS, depois de agitar suavemente, remover o soro residual.

Digestão: Adicione a enzima yi pré-aquecida (como T25 mais 1 ml) e agite suavemente para que a enzima yi cobra todas as células.

Incubação: Digestão a temperatura ambiente por cerca de 2 minutos (o tempo varia de acordo com a célula).

Observação: Observe sob o microscópio até que ≥ 90% das células se arredondem e desmoronam. Se não for possível, verifique a cada 30 segundos.

Terminação: Quando as células são completamente dissolvidas, imediatamente adicionar o dobro do volume da enzima Yi no meio pré-aquecido para terminar a digestão.

7. Sopro: Sopre suavemente a parede da garrafa com um pipete para que as células caiam e se espalhem em uma suspensão de células individuais.

8. Centrífuga: Transferir a suspensão celular para o tubo de centrifugação, centrifugar 200 x g por 3-5 minutos e descartar a limpeza.

Resuspender e vacinar: Resuspender as células com uma pequena quantidade de meio fresco e, depois de diluído em proporções apropriadas, vacinar em uma nova garrafa de cultura.

Cultivação: Coloque na caixa de cultivo. Se você usar uma tampa normal, torne a tampa para facilitar a troca de gás.

B. Transmissão celular suspensa

Recolha e centrifugação: transferir toda a suspensão celular para o tubo de centrifugação, centrifugar por 1000 rpm durante 5 minutos e descartar.

Resuspender: adicionar 1-2ml de meio fresco, suavemente ressuspender as células.

Vacinação: a suspensão celular é transferida para a nova garrafa de cultura T25 em proporção de 1: 2 e o volume total do meio de cultura é suplementado para 5-8 ml.

Cultivo: Coloque no recipiente para continuar a cultivar.

Quatro. Tratamento de problemas especiais: células adhesivas que caem durante o transporte

Algumas células mal ligadas cairão durante o transporte, o fenômeno é normal e deve ser tratado de acordo com as seguintes etapas:

Recolha: Transferir todos os meios da garrafa para um tubo centrífugo estéril e centrifugar (1200 rpm, 3-5min).

Limpeza: repousa as células com PBS e centrifuge novamente (1200 rpm, 3-5min) para descartar o PBS.

Digestão: adicionar cerca de 1 ml de enzima Yi 0,25%, misturar suavemente (não soprar fortemente), colocar no cultivo para digerir por 1-2 minutos.

Terminação e dispersão: após a remoção, soprar suavemente para que o aglomerado se disperse, adicionar rapidamente 3-5ml de meio para terminar a digestão, centrifugar (1200 rpm, 3-5min) para descartar a limpeza.

5. Resuspensão e vacinação: Adicione 5 ml de ressuspensão de meio de cultura e vacine proporcionalmente em uma nova garrafa / prato de cultura.

Observação: Observação sob o espelho. Se a célula é uma única ou um pequeno grupo de apenas 3-5 células, pode ser cultivado normalmente, para que ela cresça. --

Cinco. Resumo da política de serviço pós-venda

Dicas importantesQualquer problema anormal,Tempo para tirar fotosE entrar em contato conosco é a chave para obter suporte pós-venda.