Linha HCT15/DDP resistente a drogas

Nome da célula:Células humanas de câncer de adenoide colorretalHCT15 / DDP　

Número da mercadoria:WS155(HCT15)STR (em inglês) 鉴定）　　

Especificações:1×106cells/T25 garrafa de cultura

Uso: somente para uso científico

Introdução das células

A razão dessa célulaLinhas celulares resistentes ao DDP construídas por células HCT15.

II. Propriedades celulares

1) Fonte: câncer rectal

2) Morfologia: como células epiteliais, crescimento macular

3) Conteúdo: > 1x106 número de células

4) Especificações: garrafa T25 ou embalagem de tubo de congelamento de 1ml

5) Uso: somente para uso científico.

Preparação de meios de cultivo e condições de congelamento

1）Ver instruções detalhadas.

O soro que recomendamos FBS500-WP-002 (em inglês)

2) Condições de cultivo: fase gás: ar, 95%; CO2, 5%. Temperatura: 37 graus Celsius, umidade da bacia de cultivo de 70% -80%.

3) Liquido congelado: 90% soro, 10% DMSO, disponível atualmente.

Quatro.Tratamento celular

1) Recuperação de células congeladas

Vai conterO tubo de congelamento de 1mL de suspensão celular é rapidamente agitado e descongelado em um banho de água de 37 ° C, adicionado a um tubo centrífugo contendo 4-6mL de meio de cultura e misturado uniformemente. Centrífuga 3-5min em 1000RPM, descartar o líquido superior, o meio de culturaSuspender as células. Em seguida, a suspensão celular é adicionada a uma garrafa de cultura (ou prato) com meio de cultura de 6-8 ml para uma cultura de 37 ° C durante a noite. No dia seguinte, o crescimento celular e a densidade celular foram observados sob o microscópio.

2) Transferência celular: se a densidade celular chegar a 80% -90%, a cultura de transmissão pode ser realizada.

Para a transmissão de células de parede adherente pode fazer referência aos seguintes métodos

1. Eliminar a cultura e lavar as células 1-2 vezes com PBS sem íons de cálcio e magnésio.

Adicionar 0,25% (w / v) pancreatic albinase-0,53 mM EDTA em uma garrafa de cultura (garrafa T25 1-2mL, garrafa T75 2-3mL), colocar em uma caixa de cultura de 37 ° C para digerir por 1-2 minutos (as células difíceis de digerir podem prolongar adequadamente o tempo de digestão), em seguida, observar a digestão celular sob o microscópio, se a maioria das células se arredondar e desmontar, rapidamente recuperar a mesa de operação, bater um pouco na garrafa de cultura e adicionar 3-4ml de meio contendo 10% FBS para terminar a digestão.

3. Subir suavemente, centrifugar 3-5min em 1000RPM, descartar o líquido superior, adicionar 1-2mL de líquido de cultura e soprar bem. Divida a suspensão celular em uma proporção de 1: 2 em uma nova garrafa T25, adicione 6-8ml de novo meio de cultura configurado de acordo com as instruções para manter a vitalidade do crescimento das células, e a transmissão subsequente é realizada em uma proporção de 1: 2 a 1: 5 de acordo com as circunstâncias reais.

Atenção: transmissão celularDepois de 1 a 2 vezes, a proliferação ainda pode ser mantida, aumentando a concentração do medicamento para 0,5 ug / mL para continuar a cultivar; Se as células pararem de se multiplicar durante este processo e estiverem em mau estado, a concentração de fármaco deve ser reduzida (metade da concentração de fármaco) ou uma cultura sem fármaco para uma densidade celular de cerca de 8 x 105 unidades / mL, e substituída pela concentração de fármaco necessária quando o crescimento estiver melhor.

3) Congelação celular: após a recepção das células, é recomendado congelar um lote de sementes celulares nas primeiras 3 gerações para uso experimental posterior.

Por baixo.garrafas T25 como exemplo;

Quando as células são congeladas, de acordo com o processo de transmissão celular, as células digeridas são coletadas em um tubo centrífugo, e a contagem da placa de contagem de células sanguíneas pode ser usada para determinar a densidade de congelamento das células. A densidade de congelamento recomendada para células gerais é de 1 x 106 ~ 1 x 107 células vivas / ml.

1000rpm Centrífuga 3-5min, remover a clara superior. Suspender as células com o congelador celular preparado, por cada 1 ml de congelador contém 1 x 106 ~ 1 x 107 células vivas / ml atribuído a um tubo de congelamento para distribuir as células para o tubo de congelamento, marcar o nome, álgebra, data e outras informações.

NOTA: Não é permitido adicionar medicamentos durante o congelamento das células.

Coloque as células a congelar em uma caixa de refrigeração do programa durante a noite em um frigorífico de -80 graus e, em seguida, coloque-as em um recipiente de nitrogênio líquido para armazenar. Registre também a localização do tubo de congelamento no recipiente de nitrogênio líquido para consulta e uso posterior.

Linha HCT15/DDP resistente a drogas