Caixa de teste de oxidase de glicose (GOD)

Caixa de teste de oxidase de glicose (GOD)
Método Micrométrico
Número da mercadoria:BC0695
Especificações:100T/96S

Conteúdo do produto:
Liquido de extração:100 ml x 1 garrafa de líquido, conservação a 4 ° C;
Reagentes 1:15 ml x 1 garrafa de líquido, conservação a 4 ° C;
Reagentes 2:3 ml x 1 garrafa de líquido, conservação a 4 ° C;
Reagentes 3:Liquido 1mL x 1 unidade, -20 ° C para conservar, pode ser dividido para conservar depois de derreter.

Descrição do produto:
Deus (EC 1.1.3.4) é amplamente presente em animais e plantas, catalisando a oxidação da glicose para a produção de ácido glicoso e produzindo H2O 2, uma das vias metabólicas para a produção de oxigênio vivo no organismo.
O GOD cataliza a glicose para produzir H 2 O 2, a peroxidase cataliza a decomposição de H 2 O 2 durante a presença aeróbica para produzir oxigênio que oxida a amina de aniso vizinha para gerar substâncias coloridas, com a cor escura e a atividade da glucose oxidase em relação linear.

Precisa de equipamentos e instrumentos próprios
Espectrofotômetro visível/calibrador enzimático, panela de banho, centrífuga de mesa, pipeta ajustável, placa de microcromatização/placa de 96 buracos, molho, gelo e água destilada

Passos de operação
I. Preparação da amostra
Tratamento de tecido: pesar cerca de 0,1 g de tecido, adicionar 1 ml de extração para banho de gelo homogeneizado; 8000g 4 ℃ centrifugar por 10min, remover e colocar no gelo para teste.
Sero (plasma): teste direto.
II. Etapas de medição
1, espectrofotômetro ou calibrador enzimático pré-aquecimento de mais de 30 minutos, ajustar o comprimento de onda de 500 nm, água destilada para zero.
2, preparação do líquido de trabalho de Deus: tomar 15 mL de reagente e misturar 3 mL de reagente e ajustar o PH 5.1 (atualmente disponível).
3, amostragem:
Nome do reagente (μL) Tubo de medição
Liquido de trabalho de Deus 174
Reagentes 3 e 6
Misturar, banho de água a 37 ° C (mamíferos) ou 25 ° C (outras espécies) 5min
amostra 20
Coloque o líquido de trabalho GOD e o reagente 3 em um banho de água de 37 ° C antes de determinar a amostra e, em seguida, adicione o reagente acima na sequência
O cronograma começa ao mesmo tempo que a amostra é adicionada na placa de cronograma/96 furos; Registre a absorção inicial A1 em 20 segundos e a absorção A2 em 1 minuto e 20 segundos a um comprimento de onda de 500 nm. Calcule ΔA=A2-A1.
Cálculo da Unidade de Energia de Deus
a. A fórmula de cálculo para medição com uma placa de quartzo de porcentagem é a seguinte:
Cálculo da vitalidade de Deus em tecidos animais
1) Calculação de concentração de proteínas
Definição de unidade: por mg de histoproteína catalisada por minuto no sistema de reação para produzir 1 μmol de oxidação de anisamina ligada é definida como uma unidade de vitalidade enzimática.
GOD(U/mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V contra total÷(como Cpr×V)÷T=1333×ΔA÷Cpr
(2) Calculado de acordo com o peso da amostra
Definição de unidade: cada g de tecido catalisado por minuto no sistema de reação para produzir 1 μmol de oxidação-ligada anisamina é definida como uma unidade de vitalidade enzimática.
GOD(U/g peso fresco) = ΔA÷(ε×d) ×V contra total÷(W÷V extração×V) ÷T=1333×ΔA÷W
Cálculo da Vitalidade de Deus
Definição de unidade: por mL de soro (plasma) catalisado por minuto no sistema de reação para produzir 1 μmol de oxidação de anisamina ligada é definida como uma unidade de vitalidade enzimática.
GOD(U/mL) = ΔA÷d÷ε×V contra total÷T÷V amostra = 1333×ΔA
V anti-total: volume total da reação, 0,2 mL; V amostra: adicionar o volume da amostra, 0,02 mL; V extração, adicionar o volume do líquido extraído,
1mL; cpr: concentração de proteína da amostra, mg/mL； W: peso fresco da amostra, g; d: diâmetro de luz, 1 cm; ε: coeficiente de diluição de anisamina oxidada, 7,5 x 10 -3 mL / μmol / cm; T: Tempo de reação, 1 min.
b. Usando a fórmula de cálculo medida com uma placa de 96 buracos
Cálculo da vitalidade de Deus em tecidos animais
1) Calculação de concentração de proteínas
Definição de unidade: por mg de histoproteína catalisada por minuto no sistema de reação para produzir 1 μmol de oxidação de anisamina ligada é definida como uma unidade de vitalidade enzimática.
GOD(U/mg prot)=ΔA÷(ε×d)×V contra total÷(como Cpr×V)÷T=2222×ΔA÷Cpr
(2) Calculado de acordo com o peso da amostra
Definição de unidade: cada g de tecido catalisado por minuto no sistema de reação para produzir 1 μmol de oxidação-ligada anisamina é definida como uma unidade de vitalidade enzimática.
GOD(U/g peso fresco) = ΔA÷(ε×d) ×V contra total÷(W÷V extração×V) ÷T=2222×ΔA÷W
Cálculo da Vitalidade de Deus
Definição de unidade: por mL de soro (plasma) catalisado por minuto no sistema de reação para produzir 1 μmol de oxidação de anisamina ligada é definida como uma unidade de vitalidade enzimática.
GOD(U/mL) = ΔA÷d÷ε×V contra total÷T÷V amostra = 2222×ΔA
V anti-total: volume total da reação, 0,2 mL; V amostra: volume da amostra adicionada, 0,02 mL; cpr: concentração de proteína da amostra, mg/mL；
W: peso fresco da amostra, g; d: diâmetro de luz, 0,6 cm; ε: coeficiente de dissipação de anisamina vizinha oxidativa, 7,5 x 10 -3 mL / μmol / cm; T: Tempo de reação, 1 min.
1, a vitalidade de Deus em diferentes tecidos homogêmeros é diferente, antes de fazer o teste formal, por favor, faça apenas 1-2 pré-testes, se A2-A1>1,
Isso indica que a vitalidade do tecido é muito alta, deve ser diluído com o líquido de extração para a concentração apropriada de absorção do líquido, de modo que A2-A1 <1,
para aumentar a sensibilidade da detecção.
Se o fenômeno A1 > A2 ocorrer durante o experimento, dilua a amostra com extração para a concentração apropriada.
Dois pessoas fazem este experimento ao mesmo tempo, uma pessoa compara as cores e uma pessoa cronometra para garantir a precisão dos resultados do experimento.
Este kit só é aplicável a tecidos animais e soros animais (plasma).

Caixa de teste de oxidase de glicose (GOD) Caixa de teste de oxidase de glicose (GOD)