Interleukina de ratos - 1β

Kit de ELISA-1β de ratos

Introdução de fundo：

A IL-1 é dividida em IL-1a e IL-1β, os genes IL-1 humanos e ratos estão localizados no cromossomo 2 e contêm sete exônios. O precursor de IL-1 (ProIL-1) é de 31 kDa, formando uma molécula madura de IL-1 através da fissão da hidrolase. A IL-1 tem maior homogênia em diferentes gêneros. A nível de aminoácidos, a homogênia de IL-1α e IL-1β é de 60% a 70% e 75% a 78% em diferentes gêneros, respectivamente. IL-1α e IL-1β têm pesos moleculares de cerca de 17,5 kDa, com isopontos de 5 e 7, respectivamente, e homogênia de 28%.A IL-1β de camundongos maduros com 17kDa tem 90% de identidade de sequência de aminoácidos com a IL-1β de ratos e ratos de algodão, e 65% a 78% de identidade com a IL-1β de cães, cavalos, gatos, seres humanos, suínos e macacos.

IL-1β é produzido principalmente por células mononucleares e macrófagos no sangue, astrócitos, dendrites, córticos adrenales, células NK, endotelios, córticos, meganúcleos, plaquetas, neurônios, neutrófilos, óseos, células de Huang, células da camada nutritiva, células T e fibrócitos também podem produzir IL-1β. IL-1 tem um amplo efeito imunomodulador e tem efeitos de aquecimento e inflamação mediada。

Princípio de teste：

Solarbio (Solarbio ®)Kit de ELISA com tecnologia de detecção de imunosorbenção enzimática ligada com base na centrifugação bicorpal。Irá resistirRatoIL-1βPacotes de anticorpos monoclonais são colocados em placas enzimáticas; Adicione o padrão diluído em gradiente e a amostra pré-diluída, padrão e amostra, respectivamenteRatoIL-1βAnticorpos serão empacotados com marcadores enzimáticosCompletamentecombinação;Depois da lavagemJunte-se à resistência à biotinaRatoIL-1βAnticorposO anticorpo será embalado com a placa para ser capturado por anticorpos padrão e amostras de IL-1 em ratosβocorrência de combinações específicas; Depois da lavagemAdicionando a peroxidase de raiz (HRP) marcado com a homofilina em cadeia, a biotina e a homofilina em cadeia ocorremNão covariante de alta intensidadecombinação;Depois da lavagemAdicionando o substrato colorante TMB，Se houver concentrações diferentes na amostraRatoIL-1βEm seguida, o HRP transformará o TMB incolor em uma substância azul de diferentes clareza profunda (correlacionada positivamente), e o furo de reação se tornará amarelo após a adição do líquido de terminação; com λmax = 450 nm(OD = 450 nm)Determinação local da absorção da amostra do buraco de reação(OD)Na amostra.RatoIL-1βConcentração eODProporcional, calculado desenhando curvas padrão e software de ajuste de quatro parâmetrossairNa amostraRatoIL-1βconcentração.

Princípio:

Atenção:※※※

• O kit deve ser usado durante o prazo de validade, por favor, não use reagentes expirados.
• O kit deve ser mantido em 2-8 quando não usado.Frigorífico, dissolvidoMas...Os itens padrão não usados, por favor, descartem.
• Antes da utilização da caixapor favorRestauração a temperatura ambiente 30 min，misturar adequadamente os ingredientes ePreparadoamostras.
• Os padrões e as amostras são recomendados para testes de poros compostos durante o ensaio e a ordem em que os reagentes são adicionados deve ser mantida*.
• Para evitar a poluição cruzada, use um tubo de ensaio de uso único, cabeça de arma no teste，Filme de vedação（※）recipientes de plástico limpos..
• Os anticorpos biotinados concentrados e os compostos enzimáticos concentrados são menores em volume e as pequenas quantidades de líquido podem entrar nas paredes dos tubos e garrafas durante o transporte

Tampa, centrifuge (5-10 S) antes de usar, para que o líquido na parede do tubo se concentre no fundo do tubo e, ao retirar, use o pipete para soprar com cuidado várias vezes.

• Exceto o líquido de lavagem concentrado na caixaeO líquido de terminação pode ser universal fora, por favor, não use kits de outras fontesReagentes contidosSubstituir um único componente nesta caixa.
• Para garantir a precisão dos resultados, cada testeNecessidadeFaça uma curva padrão.

Dicas de segurança:O líquido final na caixa é uma solução ácida,Os operadores estão emQuando usadopor favorLeve luvas e preste atenção à proteção;também durante a operação.Evite o contato do reagente com a pele e os olhos e, se for incomodado, limpe com muita água; Ao testar amostras de sangue e outras amostras de líquidos corporais, por favor, aplique as regras de gestão relacionadas à proteção da segurança do Laboratório Biológico Nacional.

Composição e armazenamento do kit：

Equipamento experimental próprio (não disponível, disponível sob encomenda)

• Calibrador enzimático (comprimento de onda principal 450 nm, comprimento de onda de referência 630 nm)
• Pipetes de alta precisão e sucção única: 0,5-10,2-20,20-200,200-1000 μl
• Máquina de lavar louça ou garrafa
• 37℃incubaçãoEducaçãocaixa
• Água dupla a vapor, água deionizada, cilindro, etc.
• Tubos de ensaio de polipropileno para diluição

Coleta e armazenamento de amostras:

• Cultura de células:

Mover o meio de cultura celular para uma centrífuga estéril em condições de 4 ° C 1000×g centrifugar 10 min, em seguida, dividir a quantidade equivalente em tubos EP pequenos e em -2Conservação a 0°C(O teste pode ser armazenado a 2-8 ° C em 24 horas)Evite o congelamento repetido.

• Amostras de soro:

A temperatura ambiente do sangue coagula naturalmente após 20 min, em condições de 4 ° C 1000×g centrifugar 10 min, em seguida, dividir a quantidade equivalente em tubos EP pequenos e em -2Conservar a 0 ° C (detecção dentro de 24 horas pode ser colocado em armazenamento a 2-8 ° C), se houver precipitação durante a conservação, centrifuge novamente para evitar o congelamento repetido.

• Amostras de plasma:

Coletar sangue inteiro em um tubo contendo anticoagulantes, selecionar EDTA, citrato de sódio ou hepatina como anticoagulante de acordo com os requisitos reais da amostra, misturar por 20 min e 1000 em 4 ° C×g centrifugar 10 min, em seguida, dividir a quantidade equivalente em tubos EP pequenos e em -2Armazenamento a 0 ° C (detecção dentro de 24 horas pode ser colocado em armazenamento a 2-8 ° C), para evitar o congelamento repetido。

※Atenção:As amostras de plasma sérico evitam a utilização de amostras hemolíticas e hiperlipídicas para não afetar os resultados do teste；Se na amostraalvoA concentração de detecção é maior do que o valor do produto padrão, por favor, teste a amostra após a diluição de múltiplos apropriados, recomenda-se fazer um pré-experimento antes do experimento formal para determinar o múltiplo de diluição.

Preparação do Reagente：

• Reagentes: 30 min antes do experimentocaixa de teste,A testaramostraPosicionado emTemperatura ambienteabaixoSe o líquido de lavagem concentrado for cristalizado, coloque-o em um banho quente de 37 ° C até que o cristal se dissolva completamente.。
• PreparaçãoLiquido de lavagem:Pré-calcular o volume de uso do líquido de lavagem diluído e, em seguida,Com vapor duplo ou água deionizada20 vezes.Liquido de lavagem concentrado diluído em1 vezAplicação de líquido, líquido de lavagem concentrado não usado4℃Manter no frigorífico.

3. Produtos padrãoDilução gradiente：Adicionar produtos padrão/amostradiluição (SR1 (em inglês)1mlMesclar suavemente o produto padrão para liofilização durante 15 minutos até que ele * se dissolva (concentração de2000pg/ml)， entãode acordo comAs seguintes concentrações:2000、1000, 500, 250, 125, 62,5, 31,25, 0 pg/ml para diluição. Liquido padrão dissolvido (2000pg/ml (em inglês)Os resíduos não usados devem ser descartados ou divididos de acordo com a necessidade de uma única dose e armazenados em um frigorífico de -20 a -80 ° C.Especificamente como segueimagem。

4. Liquido de trabalho de anticorpos biotinizados:Calcule antecipadamente.A quantidade necessária para o teste, com diluição de detecção (Scom R2)100 vezes a concentração de anticorposDiluçãoAplique duas vezes o líquido de trabalho (Misturar adequadamente antes de diluir），por favorEm 30 minutos.Adicionado ao buraco de reação.

Liquido de trabalho específico de anticorpos biotinizadosMétodo de diluiçãoAssim como segue:

5. Liquido de trabalho do composto enzimático: preparado de acordo com a dose necessária para cada ensaio, diluído com o líquido do composto enzimático (SR3) diluir 100 vezes o composto concentrado emAplicação 1 vezLiquido de trabalho（Antes da diluiçãocentrifugação)Por favor, use em 30 minutos.。

Liquido de trabalho específico de compostos enzimáticosMétodo de diluiçãoAssim como segue:

6. Método de lavagem:

• Lavagem automática da placa: descarte o líquido no orifício da placa de marcação enzimática, seque no papel de água espessa e injete o líquido de lavagem para 300 ul / buraco, infusão e extração com um intervalo de 30 segundos, lavar a placa 5 vezes.
• Lavar a placa manualmente: descarte o líquido no orifício da placa de marcação enzimática, seque-a em papel de água espessa e adicione o líquido de lavagem com uma garrafa300 ul / buraco, após 30 segundos de reposição para limpar o líquido no buraco da placa de marcação enzimática, secar em uma camada espessa de papel absorvente de água, lavar a placa 5 vezes.

Passos de detecção:

Resultado do julgamento：

Determine o OD com um calibrador enzimático de 450 nm de comprimento de onda. Selecione a detecção de comprimento de onda duplo, o comprimento de onda de referência é de 630 nm. Se a detecção de comprimento de onda duplo não for possível, use o comprimento de onda de 450 nmODValor de mediçãoSubirade 630 nm.ODValores de medição.

Calcular o valor médio de OD de cada produto padrão e amostra: o valor de OD de cada produto padrão e amostra deve ser subtraido do valor de OD de zero.

3. Leve a concentração padrão como coordenada horizontal, o valor de absorção OD como coordenada longitudinal, desenhe curvas padrão com software, amostrameioIL-1βO conteúdo pode ser aprovadoCorrespondenteO valor OD é convertido pela curva padrão para a concentração correspondente.

Se o valor OD da amostra for superior ao limite superior da curva padrão,fazerApós diluição adequadaDetectar novamentePara calcular a concentração, multiplique o múltiplo de diluição.。

Caracterização de parâmetros：

Dados e curvas padrão

Este gráfico é somente de referência e deve ser calculado a partir da curva padrão desenhada para os padrões do ensaio em curso.RatoIL-1βConteúdo da amostra

2. Sensibilidade:

Baixa detectabilidadeRatoIL-1βConcentração até15em pg/ml,

A média de 20 OD de concentração padrão zero, juntamente com dois desvios padrão, calcula a concentração detectável correspondente.

3. Especificação:

Não comRatoO IL-2、3、4、6、7、10IL-1a e IL-1RaEspere a reação.

4. Repetibilidade:

Coeficiente de variação entre placas < 10%

5. Taxa de recuperação:

SelecionadosaúdeRatoPlasma sanguíneoCultura celular limpa3 níveis diferentes de concentraçãoRatoO IL-1βCalcular a taxa de recuperação.

6. Dilução linear：

separadamente selecionados.4 SaúdePlasma e culturas celulares de ratosAdicionar alta concentraçãoRatoO IL-1βdiluição dentro da faixa dinâmica da curva padrão, avaliando a linearidade.

Referências：

1Dinarello, C.A. (1994) Eur. Rede de citoquinas.5:517.

2Março, C.J. et al. (1985) Natureza315:641.

3Sims, J. E. et al. (1989) Proc. Natl. Acadêmico. Ciência. EUA86:8946.

4Sims, J.E. et al. (1988) Ciência241:585.

5Huang, J. et al. (1997) Proc. Natl. Acadêmico. Ciência. EUA94:12829.

6Wesche, H. et al. (1997) J. Biol. Química.272:7727.

7Sims, J. E. et al. (1993) Proc. Natl. Acadêmico. Ciência. EUA90:6155.

8Giri, J.G. et al. (1994) J. Imunol.153:5802.

9Symons, J.A. et al. (1995) Proc. Natl. Acadêmico. Ciência. EUA92:1714.

10Wewers, M.D. et al. (1997) J. Imunol.159:5964.

11Gonzales-Hernandez, J.A. et al. (1995) Clínica. Exp. Imunol.99:137.

Perguntas frequentes e soluções：

Kit de ELISA-1β de ratosInstruções de encomenda:

A grande maioria dos produtos estão em stock, em geral, podem ser encomendados no mesmo dia de envio.
Alguns produtos muito usados ​​precisam ser reservados com 1-2 dias de antecedência e futuros no exterior precisam ser reservados com 3-6 semanas de antecedência.
Os preços de alguns produtos podem mudar devido ao período de entrega, lote e outros fatores, se houver mudança, o novo preço no dia do pedido será aplicado.
O prazo para pedidos diários é das 16h, algumas cidades podem chegar às 17h, devido ao excedimento do prazo, os que não podem enviar no dia seguinte serão enviados no dia seguinte.
5, por favor, depois de concluir o pagamento, comunique-nos com o endereço do destinatário, nome, etc. por fax, mensagem de texto, etc.

Instruções de transporte:

Produtos de extrema baixa temperatura: o transporte de gelo seco durante o transporte de produtos de extrema baixa temperatura. Envolva o produto com gelo seco, sela a caixa de espuma, pegue a caixa de espuma em camadas de fita, coloque-a na caixa da Solebar e entregue-a à cooperação expressa, segura, rápida e eficiente e segura nas mãos dos clientes, garantindo a estabilidade do produto e acompanhando seu experimento.
Produtos a baixa temperatura: Sacos de gelo da Soleibol são adicionados durante o transporte de produtos a baixa temperatura. Envolver o produto com um saco de gelo, selar a caixa de espuma, selar a caixa de espuma com fita, colocar a caixa da Solebar (o efeito de isolamento pode durar menos de uma semana), em seguida, entregar para a cooperação expressa, segura, rápida e eficiente e segura para as mãos dos clientes, garantir a estabilidade da natureza do produto e acompanhar o seu experimento.
Produtos a temperatura normal: o transporte de produtos a temperatura normal não requer gelo ou embalagens especiais. Os produtos são distribuídos rapidamente pelo pessoal de armazém da empresa, e a entrega rápida e eficiente garante a entrega rápida dos produtos em suas mãos.