Kit de teste de teor de ácido vegetal

Instruções do kit de teste de ácido vegetal

Método Micrométrico

Número da mercadoria:BC5845

Especificações:100T/48S

Composição do produto: verifique cuidadosamente se o volume do reagente é consistente com o volume dentro da garrafa antes de usar, por favor, entre em contato com a equipe da Solebar em tempo útil.

Formulação da solução:

Reagente 2: Adicionar 4 ml de reagente antes da administração, dissolver completamente; Conservação em parcelas com reagentes intermináveis -20 ℃4Semanas para evitar congelamento repetido;

Reagente 3: adicionar água destilada de 2,36 mL antes da administração para dissolver completamente, e depois estender a cabeça da arma na superfície líquida adicionando lentamente0,64 mlÁcido sulfúrico concentrado, misturado adequadamente; 2-8 ° C pode ser conservado4Semana;

Reagente 4: adicionar 15mL de água destilada antes da administração para dissolver completamente, e depois estender a cabeça da pistola sob a superfície do líquido para adicionar lentamente15 μLÁcido sulfúrico concentrado, misturado adequadamente; 2-8 ° C pode ser conservado4Semana;

Liquido de trabalho: antes da administração de acordo com o volume de amostra de acordo com o reagente 3: reagente 4 = 1 mL: 5 mL (total)6 ml，40T)proporções misturadas, após a configuração no mesmo dia;

5, produtos padrão: adição de 1,08 mL de reagente antes do uso clínico, uma dissolução completa, preparado em 10 μmol / mL de ácido vegetal padrão, conservação de 2-8 ° C por 4 semanas;

Preparação de produtos padrão 250nmol / mL: 50 μL de 10 μmol / mL de ácido fitológico padrão e 450 μL de água destilada misturada para 1 μmol / mL de produtos padrão (ou seja, 1000 nmol / mL) antes da administração; 250 μL 1000 nmol/mL do produto padrão e7A mistura de água destilada de 50 μL é composta por 250 nmol / mL de ácido fitogénico padrão para a medição de tubos padrão da tabela de operação abaixo.

Descrição do produto:

Ácido fítico, também conhecido como ácido mionol hexafosfato e ácido ciclohexafosfato, é comumente encontrado nas células eunucléares e desempenha um papel fundamental em muitas atividades celulares, tais como: manter a estabilidade do fosforo inorgânico, participar na transmissão de sinalização de hormônios vegetais e participar como fator auxiliar de enzimas.DNAreparação,RNAEditar eARNmexportação. O ácido fitogênico fornece a principal fonte de fósforo durante a germinação e o crescimento das plantas e é amplamente encontrado em alimentos vegetais como grãos, feijões, frutas, legumes e frutas secas.

Em certas condições ambientais, a plantase pode decompor o plantato de sódio (hexafosfato de 12-sodio de miotenol) para produzir fósforo inorgânico e derivados de miotenol, em condições ácidas, o fósforo inorgânico e o molybdeno de amônio reagem, produzindo uma substância azul de molybdeno azul, cujo pico de absorção característico é de 700 nm, através da medição do teor de fósforo inorgânico, o teor de ácido plantánico pode ser calculado.

Nota: Antes do experimento é recomendado selecionar 2-3 amostras com grandes diferenças esperadas para pré-experimento.

Instrumentos e equipamentos necessários:

Espectrofotômetro visível/calibrador enzimático, centrífuga de baixa temperatura, panela de banho de água/Cámara de cultivo termostática, balança de análise, vaso de viscosidade de vidro/96Placa furada, pistola de pipeta ajustável/amortiguador,Ácido sulfúrico concentrado（>98%，AR）Gelo e água destilada.

Passos operacionais:

Um,Tratamento de amostras(O volume de amostra pode ser ajustado adequadamente, as proporções específicas podem ser consultadas na literatura)

1. amostra de plantas frescas: de acordo com a qualidade (g): um volume de líquido extraído(ml)para1：5~10proporção (proporção recomendada)0.1gJunte-se.1mlLiquido de extração 1) Adicionar o líquido de extração 1, após a homogeneização completa, oscilação a temperatura normal2 horasE então em4℃，10000gCentrífuga10 minutos， 取0,8 mlLiquido e adicionar lentamente.0,15 mlLiquido de extração 2, misturar lentamente até que não haja bolhas,4 ℃ 10000 gCentrífuga10 minutosDepois, leve para teste.

2. amostra de plantas em pó seco: de acordo com a qualidade (g): volume de líquido extraído(ml)para1：5~20proporção (proporção recomendada)0.05gJunte-se.1mlLiquido de extração 1) Adicionar o líquido de extração 1, após a homogeneização completa, oscilação a temperatura normal2 horasE então em4℃，10000gCentrífuga10 minutos， 取0,8 mlLiquido e adicionar lentamente.0,15 mlLiquido de extração 2, misturar lentamente até que não haja bolhas,4 ℃ 10000 gCentrífuga10 minutosDepois, leve para teste.

3. amostra de líquido: tomar 100 μL de líquido adicionado1mlLiquido de extração 1, oscilação a temperatura normal2 horasE então em4℃，10000gCentrífuga10 minutos， 取0,8 mlLiquido e adicionar lentamente.0,15 mlLiquido de extração 2, misturar lentamente até que não haja bolhas,4 ℃ 10000 gCentrífuga10 minutosDepois, leve para teste.

Nota:Liquido de extração 2É necessário adicionar lentamente, após a adição vai gerar uma grande quantidade de bolhas, recomenda-se o uso2mL tubo EP para operação.

II. Etapas de medição

1. Espectrofotômetro visível / calibrador enzimático pré-aquecimento30 minutosacima, ajustar o comprimento de onda para700 nmO espectrofotometro visível destila água zero.

Folha de operação: (1.5mLEP tubo adicionar os seguintes reagentes)

Cálculo do teor de ácido vegetal

1. Calculado pela concentração de proteína da amostra

Conteúdo de ácidos vegetais (nmol / mg prot)=ΔA Determinação× Calvo÷ΔA padrão× VTipo÷(V)Tipo×Cpr) = 250×ΔA Determinação÷ΔA padrão÷Cpr

2. Calculado pela qualidade da amostra

Conteúdo de ácidos vegetais (nmol/g em massa)=ΔA Determinação× Calvo÷ΔA padrão× VAlta 清晰度+ VLiquido de extração 2÷ (W × V)Alta 清晰度÷VExtração líquida 1)

=296.875×ΔA Determinação÷ΔA padrão÷W

Calculação por volume de líquido

Conteúdo de ácidos vegetais (nmolar / ml)=ΔA Determinação× Calvo÷ΔA padrão× VAlta 清晰度+ VLiquido de extração 2÷ [V]líquido× VAlta 清晰度÷(V)Extração líquida 1+ Vlíquido)]

=3265.625×ΔA Determinação÷ΔA padrão

Norma C: Concentração de tubo padrão, 250nmol/mL； V: adicione o volume da amostra,0,12 mlV: volume de líquido durante a extração,0,8 ml；VLiquido de extração II: adicionar o volume do líquido de extração II,0,15 ml；VExtrato 1: volume de extrato adicionado,1mlCpr: concentração de proteína da amostra;mg / mLV: volume da amostra líquida,0,1 mlW: qualidade da amostra,g。

Atenção:

1. se∆A determinação é menor que0.010Ou medir o valor de absorção do tubo perto do tubo vazio, pode aumentar o volume de amostra depois de medição; se∆A determinação é maior que1Recomenda-se que a amostra seja diluída adequadamente com água destilada. Observe a sincronização da modificação da fórmula de cálculo.

Se a amostra aparecer turbulenta após a adição do líquido de trabalho, recomenda-se diluir adequadamente a amostra com água destilada. Observe a sincronização da modificação da fórmula de cálculo.

O líquido de extração contém precipitante de proteína, portanto, o líquido não pode ser usado para a determinação da concentração de proteína. Para determinar o teor de proteína, é necessária uma amostra separada.

Exemplos experimentais:

Pese a amostra de cebola de 0,1044g e siga as etapas de extração e medição.96Cálculo da medição da placa:ΔA Determinação= ADeterminação- AComparação=0.411-0.375=0.036，ΔA padrão= Apadrão- AEspaço=0.811-0.096=0.715De acordo com a qualidade da amostra:

Conteúdo de ácidos vegetais (nmol/g em massa)=296.875×ΔA Determinação÷ΔA padrão÷W=143,18nmol/g em massa.

Pese 0,05 g de farinha de trigo e siga as etapas de extração e medição,96Cálculo da medição da placa:ΔA Determinação= ADeterminação- AComparação=0.331-0.188=0.143，ΔA padrão= Apadrão- AEspaço=0.811-0.096=0.715De acordo com a qualidade da amostra:

Conteúdo de ácidos vegetais (nmol/g em massa)=296.875×ΔA Determinação÷ΔA padrão÷W=1187,5nmassa em mol/g.

Referências:

[1] Senna R, Simonin V, Silva-Neto M A C, et al. Indução da atividade da fosfatase ácida durante a germinação de sementes de milho (Zea mays). [J]. Fisiologia de plantas e bioquímica, 2006, 44(7-9):467-473.

[2] Iqbal T H, Lewis K O, Cooper B T. Atividade da fitase no intestino delgado humano e do rato [J]. Gut, 1994, 35(9):1233-1236.

[3] Azeke M A, Egielewa S J, Ihimire E. Efeito da germinação sobre a atividade da fitase, fito e teor total de fósforo do arroz (Oryza sativa), milho (Zea mays), milho (Panicum miliaceum), sorgo (Sorghum bicolor) e trigo (Triticum aestivum) [J]. Journal of Food Science & Technology (em inglês), 2011.

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