Kit de Identificação de PCR de Colônia de Carreira T Universal Carreira de Princípio T4

Kit de identificação de PCR de colônia de veículo T universal

Kit de Identificação de PCR de Colônia de Carreira T Universal Carreira de Princípio T4

Número de catálogo:42015

Composição, armazenamento e estabilidade:

Armazenamento:-20 ℃ 保存。

Introdução do produto:

ColôniasPCRIdentificação éTMétodo fácil e rápido para identificar se houve clonagem positiva (incluindo fragmentos inseridos) zui após a conexão de clonagem de veículo. Mas as colônias que podem ser vistas no mercadoPCRKits de teste de identificação são usadosT3, T7ouO SP6Esperar EspecíficoTPortador inicial, só pode ser usado para um determinado tipo deTIdentificação de clones positivos ligados ao veículo. Se o uso for diferenteTPortadores, é necessário comprar vários kits de identificação ao mesmo tempo, aumentando significativamente os custos de uso. A empresa adota o uso geralTDesenvolvimento geral de portadoresTColônias de TransportadoresPCRKit de identificação, basta comprar um kit para usar todos os produtos comuns no mercadoTTransportador(Incluídoo pGEM，pUC，pBluescript (em inglês)Série)Identificação de clones positivos ligados. Além disso, a adoçãoT3, T7ouO SP6Colônias de primadosPCRA distância entre os primeiros kits de identificação e o local de inserção é muito curta, portanto, na identificação100bpQuando o segmento esquerdo ou menor é inserido, a faixa de dímero precursor do clone negativo e a faixa de amplificação do clone positivo são de tamanho próximo e não podem ser diferenciados. Muitas vezes, a faixa do dímero precursor é vista como uma faixa de amplificação positiva, causando falsos positivos. Pelo contrário, causam falsos negativos. Esta caixa é universalTA distância do portador quando o segmento não é inserido é pelo menos150bpAcima, juntamente com o comprimento do segmento inserido, pode ser claramente distinguido se a faixa é ampliada pelo segmento inserido ou a faixa é ampliada pelo dímero de introdução. Evitar falsos positivos ou falsos negativos melhora significativamente a precisão.Tubo portátil desenvolvido pela empresaPCR MasterMixSistema de pré-mistura, sem a necessidade de adicionar vários ingredientes, adicionar diretamente colônias de filtragem1Cerca de uma hora.PCROs resultados da identificação das colônias recombinantes podem ser obtidos através de testes de reação e eletróforese.

Ampliação prevista:

Atenção:

1. Ao reorganizar a identificação de colônias, antes de escolher uma única colônia, deve ser marcado para facilitar o uso após a identificação.

2. Ao escolher uma colônia, escolha uma colônia única, não escolha muitos bactérios para evitar o impactoPCRO resultado.

3. ConfiguraçõesPCRNo processo, decida o tempo de extensão de acordo com o tamanho do segmento inserido, se o tamanho do segmento inserido for1 kbAbaixo, a extensão do tempo30-45Em segundos, se o segmento for mais longo, o tempo de extensão pode ser aumentado nessa proporção.

Etapas operacionais (para25mlPor exemplo, o cliente também pode usar20mlsistema):

{C}1. Acompanhe o sistema abaixo que contém o precursor1 x Taq MasterMixlíquido de reação.

2. Depois de numerar a colônia no comprimido cultivado durante a noite, escolha uma parte da colônia única para adicionar o líquido de reação acima usando a cabeça de pistola esterilizada e misture para que a colônia se disperse completamente no líquido de reação.

Um tubo adicional de controle negativo sem colônia pode ser configurado para facilitar a análise dos resultados experimentais.

3. SeráPCRO tubo é colocado no ciclómetro térmico para começar a reagir sob as seguintes condições, as condições recomendadas são as seguintes:

94℃10 minutos

94℃30 segundos

55℃30 sec 30-33 ciclos

72℃0,5-1 minutos

72℃5 minutos

Observação: Ajuste o tempo de extensão de acordo com o tamanho do segmento inserido. Tempo preditivo prolongado para10minutos, principalmente para desintegrar a colônia, libertarDNAModelos.

Após o fim da reação,5-10mlDetecção de eletroforese direta.

NOTA: Se as bactérias são difíceis de fissurar ou as impurezas são falsamente negativas, tente o método abaixo para liberar a fissuraDNADepois proceder.

1. Escolha uma colônia para se juntar 50ml diaÁgua (ou10ml diana água), abalar.

2. 99grau,10Minutos para ativar a enzima no líquido e liberarDNA。

3. 12000rpmCentrífuga1minutos para remover os fragmentos celulares.

4. RemoverPCR，25ml PCRsistema pegar5ml(início)50ml diaágua), ou1ml(início)10ml diaÁgua) fazer um modelo.

Kit de Identificação de PCR de Colônia de Carreira T Universal Carreira de Princípio T4