Guia de processo completo de caracterização de anticorposServiços técnicos de detecção

Guia de processo completo de caracterização de anticorposServiços técnicos de detecçãoDetalhes

Os anticorpos, como moléculas-chave na pesquisa básica e na biomedicina, têm um impacto direto na confiabilidade dos resultados experimentais e na eficácia das aplicações downstream. A caracterização dos anticorpos do sistema ajuda a identificar suas características estruturais, atividade funcional e estabilidade e é um passo fundamental para garantir a consistência da qualidade dos anticorpos e a controlabilidade funcional, especialmente em áreas como o desenvolvimento de medicamentos, reagentes de diagnóstico e tratamento de jīngzhǔn.

Por que a caracterização de anticorpos é importante?

Os anticorpos são uma classe de moléculas imunológicas altamente específicas e funcionais, mas em aplicações práticas, o desempenho dos anticorpos muitas vezes varia significativamente devido às diferenças estruturais ou à forma como são preparados. A tarefa principal da caracterização de anticorpos é:

• Confirmar a sequência de anticorpos e a estrutura molecular.

• Clarificar sua capacidade de combinação e especificidade.

• Avaliar sua estabilidade, pureza e atividade biológica.

Esta não é apenas uma garantia fundamental para a repetibilidade e a credibilidade dos resultados da pesquisa básica, mas também um importante nível de qualidade antes da fase clínica em áreas como o desenvolvimento de anticorpos e diagnóstico de acompanhamento CDx.

Processo central e caminho técnico da caracterização de anticorpos

A caracterização de anticorpos geralmente inclui as seguintes etapas principais, cada uma com os meios técnicos e indicadores analíticos correspondentes.

Confirmação de Sequência (Sequence Confirmation)

(1) Objetivo: Confirmar as informações de sequência da região variável (VH, VL) e da região constante (CH) dos anticorpos para garantir a consistência e a controlabilidade dos anticorpos.

2) Tecnologia comum:

• Dessequência por espectroscopia de massa (LC-MS/MS): Adequado para anticorpos produzidos, mas que não possuem informações de sequência primitivas, a sequência de rebote a partir do nível da proteína é possível.

• Sequenciamento de cDNA: Aplicado a células de híbridos ou veículos de expressão, a sequência de genes de anticorpos é obtida diretamente no nível do ácido nucleico.

Análise de Pureza e Integridade (Purity & Integrity)

(1) Objetivo: assegurar que os anticorpos não sejam agregados, degradados ou modificados, garantindo a sua estabilidade estrutural e a consistência dos experimentos a seguir.

2) Tecnologia comum:

• SDS-PAGE/Western Blot: Avaliação aproximada do peso molecular dos anticorpos e da proporção cadeia pesada/cadeia leve.

• SEC-HPLC (filtração em gel): separação de monómeros e agregados, jīngzhǔn avaliar o nível de agregação.

• CE-SDS: Método de eletróforese de alta resolução para automatizar a análise da integridade da cadeia pesada e leve.

• Espectroscopia de massa: para detectar degradação ou modificação leve de anticorpos, especialmente adequado para cenários de controle de qualidade.

Glicosilação e Análise PTM

(1) Objetivo: O padrão de glicosilação dos anticorpos afeta significativamente a sua estabilidade estrutural com a função imunológica mediada pela Fc. Outras modificações pós-traduzidas (como oxidação, desamida) também devem ser monitoradas.

2) Tecnologia comum:

• Glycan Profiling: Identificação rápida do tipo de cadeia de açúcar e da abundância relativa.

• Análise gráfica de proteína/péptido LC-MS: Identificação da localização e tipo de modificação após a tradução.

• Foco isoeléctrico capilar (cIEF): avalia mudanças isoeléctricas que refletem indiretamente o estado de modificação.

Avaliação de Binding Specificity & Affinity

(1) Objetivo: verificar se os anticorpos identificam específicamente o alvo e quantificar ainda mais seus parâmetros de afinidade (como o valor de KD).

2) Tecnologia comum:

• ELISA: Determine rapidamente se está ligado ao antígeno alvo.

• Western Blot / IHC: Verificar a capacidade de identificação específica de anticorpos em amostras diferentes.

• Resonância de plasma de superfície (SPR) / interferência da biosfera (BLI): Determinação de parâmetros dinâmicos de interação antígeno-anticorpo (ka, kd, KD, etc.) com alto fluxo e alta sensibilidade.

Análise de estabilidade e termodinâmica (Stability & Thermodynamics)

(1) Objetivo: A estabilidade física dos anticorpos no armazenamento, transporte e aplicação tem um impacto significativo no seu desempenho.

2) Tecnologia comum:

• DSC (Temperatura de Varredura Diferencial): Determina a temperatura de degeneração térmica (Tm) dos anticorpos, refletindo a sua estabilidade térmica.

• DLS (Dispersião Dinâmica da Luz): Detecta a tendência de aglomeração de anticorpos em solução.

• Experimento de estabilidade acelerada: avaliar a estabilidade dos anticorpos em diferentes condições de pH, temperatura, congelação repetida, etc.

Diferenças nas estratégias de caracterização para tipos específicos de anticorpos

Diferentes fontes ou usos de anticorpos, suas estratégias de caracterização também variam:

Desafios comuns e recomendações de otimização na caracterização de anticorpos

A acumulação de anticorpos é difícil de separar

Recomenda-se a combinação de SEC-HPLC e DLS para a confirmação multidimensional da proporção monomérica.

Modificações difíceis de reconhecer após a tradução

A análise LC-MS/MS de nível dànbáizhí pode ser usada para melhorar a taxa de detecção de modificações.

Anticorpos comerciais com sequência desconhecida são difíceis de controlar

Recomenda-se a utilização de sequenciamento de massa de novo em combinação com expressão recombinante para validação de ciclo fechado de qualidade.

V. Biotecnologia da Betypake: plataforma de serviço de caracterização de anticorpos de parada única

Em todos os pontos-chave da caracterização de anticorpos, a BiotechnologyPT oferece soluções personalizadas:

• Plataforma de espectroscopia de massa Orbitrap e Q-TOF de alta resolução.

• Análise de sequência completa de anticorpos com PTM modificado mapa panorâmico.

• Serviço de avaliação de dinâmica de afinidade SPR/BLI.

• A análise de anticorpos cumpre os padrões cGMP.

Se você está realizando pesquisas científicas básicas, desenvolvendo produtos de diagnóstico ou promovendo a declaração IND de anticorpos, podemos construir um sistema de dados de caracterização de anticorpos científico e confiável para você.

A caracterização de anticorpos não deve ser apenas uma etapa de “validação”, mas um importante passo inicial para promover a inovação e a garantia de qualidade. Através de processos de caracterização de anticorpos sistemáticos, abrangentes e orientados por dados, os pesquisadores e as empresas biomédicas podem avançar com mais segurança no desenvolvimento downstream e na transformação clínica. A BioTecnologia da Betypack está sempre empenhada em ser o seu parceiro confiável de análise de anticorpos, contribuindo para a pesquisa científica de alta qualidade e o desenvolvimento médico da jīngzhǔn.

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Projetos de Biotecnologia da Betypake

Sequência de proteínas

Usando o novo espectrômetro de massa Obitrap Fusion Lumos da Thermo e o sistema de sequência de degradação Edman da Shimazu para analisar sequências de dànbáizhì, a Biotechnolojia da PT fornece serviços de análise de sequência de proteínas baseadas em espectro de massa, incluindo análise de composição de aminoácidos de dànbáizhì, análise de Nduāncèxù, Cduāncèxù e sequência completa, bem como análise de sequências do extremo N de dànbáizhì baseada em degradação Edman. Para a dànbáizhì com sequências teóricas desconhecidas, oferece-se um serviço de sequenciamento a partir do zero baseado no método de sequenciamento a partir do zero para a análise da sequência da proteína.

* Vantagens do serviço:

Adota o Obitrap Fusion Lumos, o instrumento de espectroscopia de massa mais avançado do mundo;

Cobertura de 100% da sequência de proteína alvo determinada;

Determinação de até 70 sequências de aminoácidos na extremidade N da proteína;

As amostras podem ser determinadas em várias formas: solução de proteína, faixa de proteína PVDF;

Baixa dose de amostra: a amostra de proteína só precisa de 5-10ug para completar o teste;

A sequência não é afetada por modificações da extremidade N, como fechamento da extremidade N, PEC e glicosilação.

II. Organização de dànbáizhì

A Plataforma de Espectroscopia de Massa Orbitrap Fusion Lumos da Thermo Fisher combinada com a Nano-LC oferece uma variedade de serviços de análise de dànbáizhì, incluindo dànbáizhì quantitativa, dànbáizhì direcionada, polipéptida e proteômica modificada após tradução. Além disso, a PT Biotech lançou um novo serviço de dànbáizhì 4D baseado no timsTOF Pro, que facilita pesquisas em proteômica de amostras em microescala, medicina de grandes amostras e modificação de alta potência.

* Vantagens do serviço:

1 . Análise quantitativa de proteínas de alto fluxo: análise experimental em larga escala em grupos de controle múltiplos para a descoberta de novos biomarcadores;

2. vários métodos de marcação de dànbáizhì in vivo e in vitro, aplicáveis ​​à análise de tecidos, células, sangue e outras amostras;

Alta sensibilidade à análise espectrôlica de massa e alta repetição dos resultados experimentais;

4. pode detectar proteínas de baixa abundância, ampla gama linear;

5.zhuānyè análise bioinformática, análise mais sistemática e precisa.

Análise técnica de fluxo de espectro de massa de célula única

A biotecnologia da Betypake utiliza o sistema de fluxo de espectroscopia de massa Fluidigm para a análise técnica de fluxo de espectroscopia de massa de célula única, marcando a superfície da célula e as moléculas internas com marcadores de elementos metálicos (geralmente anticorpos específicos marcados com elementos metálicos), em seguida, separando as células individuais com o princípio da célula de fluxo, analisando o espectro de massa atômico de células individuais com espectroscopia de massa de plasma acoplado por indução (ICP-MS), e depois convertendo os dados do espectro de massa atômico em expressão molecular de sinal na superfície da célula e no interior.

* Vantagens do serviço:

Tecnologia avançada para preencher lacunas tecnológicas

A tecnologia de anticorpos marcados por metais evita os problemas de que os canais de fluorescência de fluxo tradicionais são poucos e fáceis de interagir. Com a capacidade de caracterizar vários indicadores simultaneamente a nível de uma única célula, a biotecnologia da Peptide pode detectar simultaneamente 51 proteínas alvo.

Grande quantidade de análise e baixo custo

O RNAseq de célula única é limitado por fatores como o custo, o número de células agregadas de todas as amostras é geralmente de cerca de 2x10 ^ 4, enquanto a tecnologia de espectroscopia de massa de fluxo pode analisar pelo menos 10 ^ 5 células de uma só vez (amostra única), alcançando um aumento quantitativo e o custo não é maior do que o RNAseq de célula única.

Grandes perspectivas de aplicação

Os resultados da espectroscopia de massa de fluxo podem dar mudanças na subpopulação celular, com grandes perspectivas de pesquisa no diagnóstico clínico e no estudo do mecanismo da doença;

Combinar a tecnologia de etiquetagem metálica com outras tecnologias terá uma nova direção de aplicação. Além das proteínas convencionais, a tecnologia celular de fluxo de massa também pode ser usada para modificação pós-tradução de proteínas;

É possível detectar a taxa de sobrevivência celular, tamanho celular, expressão de transcritor de mRNA, taxa de síntese de DNA e atividade de protease.

Análise imunopoliptídeomica com base em espectro de massa de alta precisão e descoberta de novos antígenos

A solução única para análise imunopoliptídeomica baseada em espectroscopia de massa de alta precisão e descoberta de novos antígenos da Biotec inclui nossa solução patenteada e altamente sensível de enriquecimento e identificação de imunópeptidos. Podemos ajudá-lo a identificar e identificar mais de 10.000 polipéptidos tipo I e mais de 10.000 polipéptidos tipo II. A análise imunopeptidómica é realizada através da nossa plataforma de análise imunopoliptídeomica de alto fluxo otimizada para identificação e quantificação repetida a partir de materiais de amostras pequenas do zuì. O serviço pode ser aplicado a pesquisas em larga escala para ajudar os pesquisadores a encontrar soluções para câncer, doenças imunológicas e doenças infecciosas e explorar alvos desconhecidos.

V. Caracterização Biofarmacêutica

Baseado em tecnologia de espectroscopia de massa de alta resolução, MALDI TOF， Tecnologia de separação cromatográfica de alta eficiência que oferece uma gama de soluções de análise de biofarmacêuticos de wánshàn, desde a composição de aminoácidos e análise estrutural de nível 1 de produtos biológicos como dànbáizhì, péptidos, anticorpos e vacinas até a análise de variabilidade e pureza do produto. O objetivo é fornecer serviços de análise de biomedicamentos de alta qualidade para ajudar os fabricantes de biomedicamentos a melhorar a qualidade dos biomedicamentos.

As sete principais plataformas de teste da biotecnologia

BioTecnologia da PTP - Caracterização de produtos biológicos, prestador de serviços de alta qualidade de espectrometria de biomassa

A Beijing Baitepike Biotechnology Co., Ltd. é dedicada a fornecer serviços de zhuānyè como testes de controle de qualidade e validação de projetos para as indústrias de dispositivos biológicos / farmacêuticos e médicos. Os laboratórios da empresa seguem as regulamentações e os princípios orientadores da NMPA, ICH, FDA e EMA, passaram pela certificação do sistema de qualidade duplo CNAS / ISO9001, estabeleceram um sistema de qualidade completo, backup de dados a frio e a calor / fora do local, medição regular do equipamento / verificação durante, rastreamento de auditoria de software, fornecendo soluções integradas e serviços técnicos para os clientes, apoiando o desenvolvimento de novos medicamentos, registro de declaração de medicamentos e lançamento de produção.

A empresa adota o sistema de controle de qualidade ISO9001, zhuānyè fornece serviços de análise de teste CRO baseados em espectro de massa;

Reconhecido pelo laboratório nacional CNAS para fornecer aos clientes serviços de pesquisa de qualidade de medicamentos em conformidade com as regulamentações farmacêuticas globais;

3. O âmbito de atividade abrange a dànbáizhí ómica, polipéptida ómica, metabólica, caracterização biofarmacêutica, análise de célula única, fluxo de espectro de massa de célula única, análise de nuvem de vida e análise de integração de espectro de matéria de vários grupos de estudantes, etc.

Sete plataformas de teste de controle de qualidade para atender às suas necessidades de serviço de parada única;

Serviço 3000 + empresas, escolha de 10000 + clientes;

Dedicado a fornecer-lhe serviços de análise de espectroscopia de biomassa de alta qualidade!

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