H9C2 Células do músculo cardíaco de rato

Células do músculo cardíaco de rato H9C2

Identificação celular

Identificação de espécies aprovada

l Fontes celulares

Banca Nacional de Recursos

Fundo celular

B. Kimes e B. Brandt subclonaram uma linhagem de células H9c2(2-1) de uma linhagem de células clonadas de tecido cardíaco embrionário de rato BD1X, que apresenta muitas características de músculo esquelético. As células musculares nesta linhagem celular podem se fundir para formar vasos musculares multinucleares e responder aos estímulos da acetilcolina. Se a concentração sérica no meio cair para 1%, a fusão ocorre rapidamente.

l Propriedades celulares

1) Fonte: Coração

2) Morfologia: células musculares, crescimento de parede

3) Conteúdo: > 1x106 número de células

4) Especificações: garrafa T25 ou embalagem de tubo de congelamento de 1ml

5) Uso: somente para uso científico.

l Condições de cultivo:

1) Preparar DMEM (contendo 1,5 g / L NaHCO3 recomendado: awcell-128-0001) ou (GIBCO, número 12800017, adição de NaHCO3 1,5 g / L); Sério bovino de alta qualidade, 10%; Duplo contra 1%.

2) Condições de cultivo: fase gás: ar, 95%; CO2, 5%. Temperatura: 37 graus Celsius, umidade da bacia de cultivo de 70% -80%.

l Atenção:

Nota: A célula H9C2 do miocárdio do rato cresce bem em meio DMEM (contendo 1,5 g/LNaHCO3) e a maioria das marcas de DMEM contém concentrações mais altas de NaHCO3 (3,7 g/L), o que requer uma maior concentração de CO2 (7%-10%) quando as células são cultivadas em meio DMEM (3,7 g/L NaHCO3).

Para a transmissão de células adherentes podem ser consultados os seguintes métodos:

1. Eliminar a cultura e lavar as células 1-2 vezes com PBS sem íons de cálcio e magnésio.

Adicionar 0,25% (w / v) pancreatase-0,53 mM EDTA em uma garrafa de cultura (garrafa T25 1-2mL, garrafa T75 2-3mL), colocar em uma caixa de cultura de 37 ° C para digerir por 1-2 minutos (as células difíceis de digerir podem prolongar adequadamente o tempo de digestão), em seguida, observar a digestão celular sob o microscópio, se a maioria das células se arredondar e desmontar, rapidamente recuperar a mesa de operação, bater um pouco na garrafa de cultura depois de adicionar 3-4ml de meio de cultura contendo 10S para terminar a digestão.

3. suavemente derrotado e aspirado, centrifugar 3-5min em 1000RPM, descartar o líquido superior, adicionar 1-2mL de líquido de cultura e soprar bem. Divida a suspensão celular em uma proporção de 1: 2 em uma nova garrafa T25, adicione 6-8ml de novo meio * configurado de acordo com as instruções para manter a vitalidade do crescimento das células, e a transmissão subsequente é realizada em uma proporção de 1: 2 ~ 1: 5 de acordo com as circunstâncias reais.

3) Congelação celular: após a recepção das células, é recomendado congelar um lote de sementes celulares nas primeiras 3 gerações para uso experimental posterior.

l Forma de transporte:

Temperatura baixa: (1) 1mL embalagem do tubo de congelamento para o transporte de gelo seco, depois de receber o frigorífico de -80 graus para conservar durante a noite após transferir para o nitrogênio líquido ou recuperação direta, se o gelo seco for descoberto volátil e limpo, a tampa da garrafa do tubo de congelamento caiu, quebrou e as células estão contaminadas, entre em contato conosco imediatamente.

Temperatura normal (2) T25 frasco de recuperação das células sobreviventes é enviado à temperatura normal, após recepção, de acordo com o tratamento após recepção das células.

Segurança Biológica:

Todas as células animais são consideradas potencialmente biológicamente perigosas e devem ser operadas dentro de um banco de biossegurança de nível secundário, com cuidado, todos os resíduos e utensílios que entraram em contato com a célula devem ser esterilizados antes de serem descartados.

Recomenda-se sempre usar luvas de proteção, roupas e máscaras de proteção durante a recuperação de células congeladas. Observação: O tubo de congelamento submerso em nitrogênio líquido vai vazar e vai lentamente encher o nitrogênio líquido. Quando descongelado, a fase de conversão de nitrogênio líquido em gás pode fazer com que o recipiente exploda ou sopra a tampa com força perigosa, gerando detritos volantes que causam danos pessoais.