Células renais embrionárias humanas 293T

HEK-293T Células renais embrionárias humanas

HEK-293T «293T».

Identificação celular

Certificação STR aprovada

l Fontes celulares

Banca Nacional de Recursos

Fundo celular

As células HEK-293T são derivadas da linha celular 293T (293tsA1609neo) (ATCC CRL-11268). As células continuam a expressar o antígeno SV40, que é frequentemente usado em experimentos de transfeção com maior eficiência. (A transfeção é geralmente colocada em uma placa de 50% de densidade, até que as células sejam colocadas na parede do prato (geralmente 8-10 horas), então a operação de transfeção pode ser realizada)

l Propriedades celulares

1) Fonte: Rim embrionário humano

2) Morfologia: como células epiteliais, crescimento da parede de adesão, capacidade de adesão fraca

3) Conteúdo: > 1x106 número de células

4) Especificações: garrafa T25 ou embalagem de tubo de congelamento de 1ml

5) Uso: somente para uso científico

l Condições de cultivo:

1) Preparar o meio de cultura DMEM (awcell-0001 recomendado); Sério bovino de alta qualidade, 10%; L-glutamina (2mM) 1%; NEAA 1% ； Dupla resistência 1%

2) Condições de cultivo: fase gás: ar, 95%; CO2, 5%. Temperatura: 37 ° C, umidade da bacia de cultivo de 70% -80%.

l Atenção:

A célula é uma célula suspensa e ligeiramente adesiva, e a transmissão pode ser feita com referência aos seguintes métodos:

Recolha: coleta as células suspensas da garrafa de cultura em um tubo centrífugo. Lave as células 1-2 vezes com PBS sem íons de cálcio e magnésio. Como a parede celular não é firme após a lubrificação do PBS, as células se desprendem, então o PBS também deve ser reciclado no tubo centrífugo.

Adicionar 0,25% (w / v) pancreatase-0,53 mM EDTA na garrafa de cultura (garrafa T25 1-2mL, garrafa T75 2-3mL) colocado em uma caixa de cultura de 37 ° C para digerir por 1-2 minutos (as células difíceis de digerir podem prolongar adequadamente o tempo de digestão), em seguida, observar a digestão celular sob o microscópio, se a maioria das células se arredondar e cair rapidamente para recuperar a mesa de operação, bater alguns toques na garrafa de cultura e adicionar 3-4ml de meio de cultura contendo 10S para terminar a digestão.

3. As células em suspensão coletadas, as células no líquido de limpeza PBS e as células de parede digeridas são centrifugadas em 1000rpml por 5min, descartar a limpeza superior, adicionar 1-2mL de líquido de cultura e ressuspender e misturar depois de dividir a suspensão celular em proporção 1: 2 em uma nova garrafa T25, adicionar 6-8ml de acordo com as instruções do novo meio * configurado para manter a vitalidade do crescimento das células, a transmissão posterior é realizada de acordo com as circunstâncias reais na proporção 1: 2 ~ 1: 5.

Congelação de células 293T de linfocitos embrionários humanos: Uma vez recebidas as células, é recomendado congelar um lote de sementes celulares durante a cultura das primeiras 3 gerações para uso experimental posterior.

l Forma de transporte:

Temperatura baixa: (1) 1mL embalagem do tubo de congelamento para o transporte de gelo seco, depois de receber o frigorífico de -80 graus para conservar durante a noite após transferir para o nitrogênio líquido ou recuperação direta, se o gelo seco for descoberto volátil e limpo, a tampa da garrafa do tubo de congelamento caiu, quebrou e as células estão contaminadas, entre em contato conosco imediatamente.

Temperatura normal (2) T25 frasco de recuperação das células sobreviventes é enviado à temperatura normal, após recepção, de acordo com o tratamento após recepção das células.

Segurança Biológica:

Todas as células animais são consideradas potencialmente biológicamente perigosas e devem ser operadas dentro de um banco de biossegurança de nível secundário, com cuidado, todos os resíduos e utensílios que entraram em contato com a célula devem ser esterilizados antes de serem descartados.

Recomenda-se sempre usar luvas de proteção, roupas e máscaras de proteção durante a recuperação de células congeladas. Observação: O tubo de congelamento submerso em nitrogênio líquido vai vazar e vai lentamente encher o nitrogênio líquido. Quando descongelado, a fase de conversão de nitrogênio líquido em gás pode fazer com que o recipiente exploda ou sopra a tampa com força perigosa, gerando detritos volantes que causam danos pessoais.