Como espectroscopia de massa é usada para análise de proteínas

Como espectroscopia de massa é usada para análise de proteínasDetalhes do serviço técnico de inspeção

A espectroscopia de massa é um método de separação e detecção baseado na relação massa-carga (m / z) de moléculas ionizadas, amplamente utilizado na análise dànbáizhì. O espectrograma de massa da amostra é obtido ionizando as moléculas da amostra e acelerando e desviando-as no campo elétrico ou magnético, separando-as de acordo com a diferença de massa e carga elétrica dos íons, e registrando a intensidade e a relação de carga de massa dos íons através do detector. Esta técnica torna a análise do dànbáizhì mais eficiente e jīngqu, permitindo um estudo aprofundado da estrutura, função e interações do dànbáizhì.

Passos-chave da espectroscopia de massa para análise de dànbáizhì

Preparação de amostras de dànbáizhì: as amostras de dànbáizhì podem ser simples (por exemplo, solução de dànbáizhì purificada, pureza > 90%) ou misturas complexas (por exemplo, lysis celulares, extratos de tecido). A separação e purificação de dànbáizhì são frequentemente usadas durante o processo de preparação por eletroforese em gel SDS-PAGE, análise de afinidade e filtragem em gel, para garantir que a análise posterior de dànbáizhì seja mais fácil.

Protease: a protease é um passo importante na análise de dànbáizhì. Devido ao grande peso molecular do dànbáizhì completo e à dificuldade de análise direta, a enzima do dànbáizhì geralmente precisa ser descoberta em segmentos peptídicos menores antes da análise espectrôlica de massa. Enzimas comumente usadas incluem a Yídànbáiméi (Tripsina), que corta a lisina e a jīngānsuān (Arginina) em dànbáizhí para produzir segmentos polipéptidos compostos de 6 a 40 resíduos de aminoácidos.

Análise de espectroscopia de massa: o segmento peptídico após a enzimólise é analisado por espectrômetro de massa. O espectrômetro de massa é geralmente composto por três partes: uma fonte de íons, um analisador de massa e um detector. As fontes de íons são responsáveis ​​pela ionização dos segmentos peptídicos, com métodos comuns como a ionização por pulverização eletrônica (ESI) e a desabsorção / ionização a laser auxiliada pela matriz (MALDI). Os analisadores de massa separam os íons de acordo com a relação de carga em massa, como a armadilha de íons (Ion Trap), o tempo de voo (TOF), o quadrupolo (Quadrupole) e o Orbitrap. O detector registra a intensidade e a relação de carga de massa dos íons, gerando espectrogramas de massa que fornecem dados para análises posteriores de dànbáizhì.

Recuperação de banco de dados e qualificação de dànbáizhì: os dados de espectroscopia de massa obtidos devem ser comparados com o banco de dados de dànbáizhì, uma etapa que geralmente utiliza software especializado para avaliar a confiabilidade dos resultados de identificação em forma de pontuação, combinando um espectrograma de massa real com um espectrograma de massa teórico (ou seja, um espectrograma de massa em segmentos peptídicos previsto após a enzimálise de dànbáizhì).

Aplicação do espectro de massa na análise de dànbáizhì

Determinação da sequência de dànbáizhì: a sequência de aminoácidos de dànbáizhì pode ser determinada pela técnica de espectroscopia de massa. Geralmente, após a análise da enzima dànbáizhì, o peso molecular de cada segmento peptídico é detectado por espectroscopia de massa, combinada com a pesquisa em banco de dados, para deduzir a sequência de dànbáizhì.

Análise de modificação pós-tradução de dànbáizhì: a tecnologia de espectroscopia de massa é capaz de detectar modificações pós-tradução de dànbáizhì, como fosforização, acetilação, veganização, etc. Analisando o espectrograma de massa do segmento peptídico perto do local da modificação, o tipo e o local da modificação podem ser identificados, revelando o impacto da modificação na função do dànbáizhì.

Análise quantitativa de dànbáizhì: a técnica de espectroscopia de massa também pode ser usada para análise quantitativa de dànbáizhì. A abundância relativa ou juéduí de dànbáizhì é determinada medindo a intensidade do sinal espectral de massa de dànbáizhì ou segmentos peptídicos específicos por meio de marcadores isotópicos (por exemplo, iTRAQ, TMT) ou quantidades sem biāojìdding (por exemplo, Label-Free Quantitation, LFQ). Isso permite que a análise do dànbáizhí estude em profundidade as mudanças na expressão do dànbáizhí em diferentes condições.

Estudo de interações de dànbáizhì: a tecnologia de espectroscopia de massa combinada com experimentos de interações de dànbáizhì (por exemplo, IP de co-precipitação imunológica) permite identificar e analisar redes de interações entre dànbáizhì. Isso ajuda a revelar a função e os mecanismos reguladores de dànbáizhì nas vias de sinalização celular.

A tecnologia de espectroscopia de massa continuará a ampliar suas aplicações nas áreas das ciências da vida e da biomedicina, especialmente na análise de dànbáizhí, fornecendo meios analíticos mais eficientes e eficientes, fornecendo um forte apoio para revelar os mistérios de dànbáizhí e resolver grandes problemas científicos.

Projetos de Biotecnologia da Betypake

Sequência de proteínas

Usando o novo espectrômetro de massa Obitrap Fusion Lumos da Thermo e o sistema de sequência de degradação Edman da Shimazu para analisar sequências de dànbáizhì, a Biotechnolojia da PT fornece serviços de análise de sequência de proteínas baseadas em espectro de massa, incluindo análise de composição de aminoácidos de dànbáizhì, análise de Nduāncèxù, Cduāncèxù e sequência completa, bem como análise de sequências do extremo N de dànbáizhì baseada em degradação Edman. Para a dànbáizhì com sequências teóricas desconhecidas, oferece-se um serviço de sequenciamento a partir do zero baseado no método de sequenciamento a partir do zero para a análise da sequência da proteína.

* Vantagens do serviço:

Adota o Obitrap Fusion Lumos, o instrumento de espectroscopia de massa mais avançado do mundo;

Cobertura de 100% da sequência de proteína alvo determinada;

Determinação de até 70 sequências de aminoácidos na extremidade N da proteína;

As amostras podem ser determinadas em várias formas: solução de proteína, faixa de proteína PVDF;

Baixa dose de amostra: a amostra de proteína só precisa de 5-10ug para completar o teste;

A sequência não é afetada por modificações da extremidade N, como fechamento da extremidade N, PEC e glicosilação.

II. Organização de dànbáizhì

A Plataforma de Espectroscopia de Massa Orbitrap Fusion Lumos da Thermo Fisher combinada com a Nano-LC oferece uma variedade de serviços de análise de dànbáizhì, incluindo dànbáizhì quantitativa, dànbáizhì direcionada, polipéptida e proteômica modificada após tradução. Além disso, a PT Biotech lançou um novo serviço de dànbáizhì 4D baseado no timsTOF Pro, que facilita pesquisas em proteômica de amostras em microescala, medicina de grandes amostras e modificação de alta potência.

* Vantagens do serviço:

1 . Análise quantitativa de proteínas de alto fluxo: análise experimental em larga escala em grupos de controle múltiplos para a descoberta de novos biomarcadores;

2. vários métodos de marcação de dànbáizhì in vivo e in vitro, aplicáveis ​​à análise de tecidos, células, sangue e outras amostras;

Alta sensibilidade à análise espectrôlica de massa e alta repetição dos resultados experimentais;

4. pode detectar proteínas de baixa abundância, ampla gama linear;

5.zhuānyè análise bioinformática, análise mais sistemática e precisa.

Análise técnica de fluxo de espectro de massa de célula única

A biotecnologia da Betypake utiliza o sistema de fluxo de espectroscopia de massa Fluidigm para a análise técnica de fluxo de espectroscopia de massa de célula única, marcando a superfície da célula e as moléculas internas com marcadores de elementos metálicos (geralmente anticorpos específicos marcados com elementos metálicos), em seguida, separando as células individuais com o princípio da célula de fluxo, analisando o espectro de massa atômico de células individuais com espectroscopia de massa de plasma acoplado por indução (ICP-MS), e depois convertendo os dados do espectro de massa atômico em expressão molecular de sinal na superfície da célula e no interior.

* Vantagens do serviço:

Tecnologia avançada para preencher lacunas tecnológicas

A tecnologia de anticorpos marcados por metais evita os problemas de que os canais de fluorescência de fluxo tradicionais são poucos e fáceis de interagir. Com a capacidade de caracterizar vários indicadores simultaneamente a nível de uma única célula, a biotecnologia da Peptide pode detectar simultaneamente 51 proteínas alvo.

Grande quantidade de análise e baixo custo

O RNAseq de célula única é limitado por fatores como o custo, o número de células agregadas de todas as amostras é geralmente de cerca de 2x10 ^ 4, enquanto a tecnologia de espectroscopia de massa de fluxo pode analisar pelo menos 10 ^ 5 células de uma só vez (amostra única), alcançando um aumento quantitativo e o custo não é maior do que o RNAseq de célula única.

Grandes perspectivas de aplicação

Os resultados da espectroscopia de massa de fluxo podem dar mudanças na subpopulação celular, com grandes perspectivas de pesquisa no diagnóstico clínico e no estudo do mecanismo da doença;

Combinar a tecnologia de etiquetagem metálica com outras tecnologias terá uma nova direção de aplicação. Além das proteínas convencionais, a tecnologia celular de fluxo de massa também pode ser usada para modificação pós-tradução de proteínas;

É possível detectar a taxa de sobrevivência celular, tamanho celular, expressão de transcritor de mRNA, taxa de síntese de DNA e atividade de protease.

Análise imunopoliptídeomica com base em espectro de massa de alta precisão e descoberta de novos antígenos

A solução única para análise imunopoliptídeomica baseada em espectroscopia de massa de alta precisão e descoberta de novos antígenos da Biotec inclui nossa solução patenteada e altamente sensível de enriquecimento e identificação de imunópeptidos. Podemos ajudá-lo a identificar e identificar mais de 10.000 polipéptidos tipo I e mais de 10.000 polipéptidos tipo II. A análise imunopeptidómica é realizada através da nossa plataforma de análise imunopoliptídeomica de alto fluxo otimizada para identificação e quantificação repetida a partir de materiais de amostras pequenas do zuì. O serviço pode ser aplicado a pesquisas em larga escala para ajudar os pesquisadores a encontrar soluções para câncer, doenças imunológicas e doenças infecciosas e explorar alvos desconhecidos.

V. Caracterização Biofarmacêutica

Baseado em tecnologia de espectroscopia de massa de alta resolução, MALDI TOF， Tecnologia de separação cromatográfica de alta eficiência que oferece uma gama de soluções de análise de biofarmacêuticos de wánshàn, desde a composição de aminoácidos e análise estrutural de nível 1 de produtos biológicos como dànbáizhì, péptidos, anticorpos e vacinas até a análise de variabilidade e pureza do produto. O objetivo é fornecer serviços de análise de biomedicamentos de alta qualidade para ajudar os fabricantes de biomedicamentos a melhorar a qualidade dos biomedicamentos.

As sete principais plataformas de teste da biotecnologia

BioTecnologia da PTP - Caracterização de produtos biológicos, prestador de serviços de alta qualidade de espectrometria de biomassa

A Beijing Baitepike Biotechnology Co., Ltd. é dedicada a fornecer serviços de zhuānyè como testes de controle de qualidade e validação de projetos para as indústrias de dispositivos biológicos / farmacêuticos e médicos. Os laboratórios da empresa seguem as regulamentações e os princípios orientadores da NMPA, ICH, FDA e EMA, passaram pela certificação do sistema de qualidade duplo CNAS / ISO9001, estabeleceram um sistema de qualidade completo, backup de dados a frio e a calor / fora do local, medição regular do equipamento / verificação durante, rastreamento de auditoria de software, fornecendo soluções integradas e serviços técnicos para os clientes, apoiando o desenvolvimento de novos medicamentos, registro de declaração de medicamentos e lançamento de produção.

A empresa adota o sistema de controle de qualidade ISO9001, zhuānyè fornece serviços de análise de teste CRO baseados em espectro de massa;

Reconhecido pelo laboratório nacional CNAS para fornecer aos clientes serviços de pesquisa de qualidade de medicamentos em conformidade com as regulamentações farmacêuticas globais;

3. O âmbito de atividade abrange a dànbáizhí ómica, polipéptida ómica, metabólica, caracterização biofarmacêutica, análise de célula única, fluxo de espectro de massa de célula única, análise de nuvem de vida e análise de integração de espectro de matéria de vários grupos de estudantes, etc.

Sete plataformas de teste de controle de qualidade para atender às suas necessidades de serviço de parada única;

Serviço 3000 + empresas, escolha de 10000 + clientes;

Dedicado a fornecer-lhe serviços de análise de espectroscopia de biomassa de alta qualidade!

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