Célula de leucemia mononuclear humana THP-1

Célula de leucemia mononuclear humana THP-1

THP1; O-THP-1; Pediatria do Hospital de Tohoku-1

Identificação celular

Certificação STR aprovada

l Fontes celulares

Banca Nacional de Recursos

Fundo celular

Estabelecido no sangue periférico de um menino de 1 ano de idade com leucemia mononuclear aguda (LMA) recorrente em 1978. A célula pode devorar as perlas de leite e os glóbulos vermelhos ativados, sem superfície e imunoglobulina citoplasmática. Diferenciação de células mononucleares pode ser induzida com o TPA de foebol.

Nota: A mutação NRAS foi erroneamente indicada como p.Gly12Ser em PubMed = 9379676.

l Propriedades celulares

1) Fonte: Leucemia aguda de células mononucleares, células mononucleares

2) Morfologia: células mononucleares, suspensão

3) Conteúdo: > 1x106 número de células

4) Especificações: garrafa T25 ou embalagem de tubo de congelamento de 1ml

5) Uso: somente para uso científico

l Condições de cultivo

1) Preparar o meio de cultura RPMI-1640 (awcell-0002 recomendado); Sério bovino de alta qualidade, 10%; 0,05 mM beta-qiu etanol (nível de cultura celular recomendado: awcell-8211); Dupla resistência, 1%.

2) Proporção de referência de transmissão: a densidade celular é controlada durante a transmissão em 2-4 x 105 células / mL e a transmissão é realizada quando as células crescem para 8-10 x 105 células / mL.

3) Frequência de troca de líquido de referência: troca de líquido durante a transmissão.

4) Condições de cultivo: fase gás: ar, 95%; CO2, 5%. Temperatura: 37 graus Celsius, umidade da bacia de cultivo de 70% -80%.

5) Liquido congelado: * Liquido de cultura 95%, DMSO 5% (após o uso deste líquido congelado, a taxa de sobrevivência de recuperação de cerca de 50% de acordo com a experiência da minha biblioteca, a recuperação requer uma cultura adicional de 7-10 dias para recuperar o crescimento)

l Atenção

[Atenção]:

A célula é uma célula em suspensão, de acordo com a experiência de cultivo e o feedback do cliente, o uso do método de semitroca de líquido é mais benéfico para o estado da célula, por isso, nossa biblioteca recomenda que você use o método de semitroca de líquido para a transmissão.

1. Depois de receber as células enviadas com um tubo centrífugo de 15 ml que fornecemos, não colete as células por centrifugação, você pode preparar duas novas garrafas de cultura T25 primeiro e, em seguida, misturar as células uniformemente para duas novas garrafas de cultura T25 e adicionar o meio para 10 ml. Coloque em uma caixa de cultura de 37 ° C.

2. Quando você receber as células enviadas em garrafas de cultura T25, colete as células por centrifugação e, em seguida, coloque as células em suspensão novamente em 12 ml de meio de cultura configurado de acordo com as instruções * e soprar uniformemente em duas novas garrafas de cultura T25.

Células suspensas de thp-1. A célula prefere ser tratada suavemente durante a cultura, com o mínimo de centrifugação para causar danos às células. Não substitua todo o meio de cultura durante a troca de líquido, recomendamos que você use o método de semitroca para a transmissão, adicionando o meio de cultura celular para diluir as células para manter a densidade.

As células são mais sensíveis à qualidade do soro, nossa biblioteca recomenda que você cultive com soro de alta qualidade de marca importada. O FBS não é ativado, se as células crescerem lentamente, tente usar outro FBS ou aumente temporariamente a concentração do FBS para 20%

O etanol beta-qiu (nível de cultura celular) deve ser adicionado ao líquido de cultura da célula e, se não for adicionado, pode afetar o estado da célula.

A estabilidade do etanol beta-qiu é limitada, o etanol beta-qiu não pode ser adicionado ao armazenamento a longo prazo no meio de cultura * e o etanol beta-mercetal é adicionado em cada transmissão ou adição líquida.

O beta-qiu-etiletanol (2-qiu-etiletanol) é adicionado a linfocitos ou outras culturas celulares porque o aminoácido cisteína no FBS usado no meio de cultura é insuficiente, enquanto a cisteína é abundante. Algumas células, como as células T, não são capazes de transportar a cisteína para a citoplasma e precisam ser convertidas em cisteína. O etanol beta-qiu reduz a cisteína em uma forma que pode ser transportada pelas células e, em seguida, é convertido em cisteína necessária para o crescimento celular. O beta-qiu-etanol também é um agente redutor que pode decompor muitos metabólicos tóxicos produzidos pelas células na cultura, melhorando assim o ambiente ao redor das células.

A célula é mais sensível à densidade celular, durante a cultura e transmissão, por favor, note manter a densidade celular na faixa apropriada (por favor, consulte especificamente as instruções da célula).

7. A taxa de recuperação da célula é baixa após o congelamento, aumente o número de células quando necessário

Normalmente, o crescimento das células pode ser mantido através da adição de meios * para as células em crescimento, as células podem ser centrifugadas a cada 7 dias e ressuspendidas em um novo meio de cultura para completar a troca total de células.

Instruções do ATCC sobre as células thp-1 para manter a vitalidade celular

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(A contagem celular frequente é a melhor maneira de monitorar a thp-1.) Essas células devem ser cultivadas a cada 2 a 3 dias, simplesmente adicionando uma pequena quantidade de meio fresco ao frasco (dando-lhes meio condicional). Você não precisa centrifugar as células e transmitir novamente todas as vezes. Quando cultivadas em nosso laboratório, no dia 2, as células podem geralmente ser expandidas para frascos maiores com mais meios de cultura. A transmissão é necessária quando a densidade celular atinge 8 x 10 5 células vivas / ml. Não é permitida densidade celular superior a 1 x 10 (6) células vivas / ml.)

1. Eliminar a cultura e lavar as células 1-2 vezes com PBS sem íons de cálcio e magnésio.

Adicionar 0,25% (w / v) pancreatase-0,53 mM EDTA em uma garrafa de cultura (garrafa T25 1-2mL, garrafa T75 2-3mL), colocar em uma caixa de cultura de 37 ° C para digerir por 1-2 minutos (as células difíceis de digerir podem prolongar adequadamente o tempo de digestão), em seguida, observar a digestão celular sob o microscópio, se a maioria das células se arredondar e desmontar, rapidamente recuperar a mesa de operação, bater um pouco na garrafa de cultura depois de adicionar 3-4ml de meio de cultura contendo 10S para terminar a digestão.

3. suavemente derrotado e aspirado, centrifugar 3-5min em 1000RPM, descartar o líquido superior, adicionar 1-2mL de líquido de cultura e soprar bem. Divida a suspensão celular em uma proporção de 1: 2 em uma nova garrafa T25, adicione 6-8ml de novo meio * configurado de acordo com as instruções para manter a vitalidade do crescimento das células, e a transmissão subsequente é realizada em uma proporção de 1: 2 ~ 1: 5 de acordo com as circunstâncias reais.

3) Congelação celular: após a recepção das células, é recomendado congelar um lote de sementes celulares nas primeiras 3 gerações para uso experimental posterior.

4) O meio de cultura para transporte (meio de irrigação) não pode mais ser usado para cultivar células, por favor, substitua o meio de cultura * recém-formulado para cultivar células de acordo com as condições de cultura celular do manual. A primeira transmissão após a recepção das células sugere a transmissão de garrafas de cultura T25 1: 2.

l Forma de transporte

Temperatura baixa: (1) 1mL embalagem do tubo de congelamento para o transporte de gelo seco, depois de receber o frigorífico de -80 graus para conservar durante a noite após transferir para o nitrogênio líquido ou recuperação direta, se o gelo seco for descoberto volátil e limpo, a tampa da garrafa do tubo de congelamento cai, quebra e as células estão contaminadas, entre em contato conosco imediatamente.

Temperatura normal: (2) T25 frasco de recuperação de células sobreviventes é enviado à temperatura normal, após recepção, de acordo com o tratamento após recepção das células.

Segurança Biológica

Todas as células animais são consideradas potencialmente biológicamente perigosas e devem ser operadas dentro de um banco de biossegurança de nível secundário, com cuidado, todos os resíduos e utensílios que entraram em contato com a célula devem ser esterilizados antes de serem descartados.

Recomenda-se sempre usar luvas de proteção, roupas e máscaras de proteção durante a recuperação de células congeladas. Observação: O tubo de congelamento submerso em nitrogênio líquido vai vazar e vai lentamente encher o nitrogênio líquido. Quando descongelado, a fase de conversão de nitrogênio líquido em gás pode fazer com que o recipiente exploda ou sopra a tampa com força perigosa, gerando detritos volantes que causam danos pessoais.