O KIT de ELISA do receptor de interferina 5 (solúvel), que usa a tecnologia de ELISA anti-clamping dupla, quantifica com precisão o soro e outras amostras do receptor, facilita a operação, ajuda a imunidade e outras áreas de pesquisa científica.
Kit de ELISA com 5 receptores de interfeína (solúvel)
Kit de ELISA com 5 receptores de interfeína (solúvel)É uma ferramenta para a detecção quantitativa do teor de receptores solúveis de interfeína 5 em amostras biológicas e desempenha um papel importante na pesquisa científica, ajudando a entender mais profundamente processos fisiopatológicos como a imunomodulação e as respostas inflamatórias. A seguir apresentamos-lhe de várias maneiras:
Princípio de testeAplicação da técnica de imunoassorção ligada a centrigenase de bicorpos (ELISA). A placa enzimática do kit foi pré-embalada com anticorpos específicos contra o receptor solúvel de interfeína 5. Após a adição à amostra, o receptor solúvel de interferina 5 na amostra se liga à especificidade de anticorpos de fase sólida. Em seguida, é adicionado um anticorpo marcado enzimáticamente para o receptor anti-interfeína 5 solúvel, que forma um complexo "anticorpo de fase sólida - receptor interfeína 5 solúvel - anticorpo marcado enzimáticamente" com o receptor ligado ao anticorpo de fase sólida. Após uma lavagem adequada, remova a substância não ligada e, em seguida, adicione a solução de substância (por exemplo, 3,3',5,5'-tetrametilbifenamina, ou TMB). Na catálise enzimática de anticorpos marcados por enzimas, o substrato ocorre em reação de coloração, com a clareza da cor proporcional ao teor de receptores solúveis de interfeína 5 na amostra. Medindo a absorção em comprimentos de onda específicos (geralmente 450 nm) com um calibrômetro enzimático, a concentração desse receptor na amostra pode ser calculada em comparação com a curva padrão.
Composição do Kit
Placa enzimática: Existem especificações de 96 ou 48 buracos, que foram pré-embalados com anticorpos anti-solúveis do receptor de interferina 5, que são veículos da reação.
Produtos padrãoGeralmente para produtos congelados, geralmente equipados com 2 garrafas. Antes da administração, diluição padrão é necessária para ser resolvida e diluída em diferentes gradientes de concentração, como 0, 15,6, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg / mL, etc., para desenhar curvas padrão.
amostra xi liberaçãoUsado para diluir as amostras a serem testadas com concentrações excessivas para garantir que a concentração da amostra esteja dentro da faixa de detecção eficaz do kit.
Anticorpos enzimáticos: ou seja, o anticorpo anti-solúvel do receptor de interferina 5 marcado com HRP (peroxidase de raiz) é um líquido concentrado, diluído com anticorpo enzimático conforme necessário.
Dilução de anticorpos enzimáticosEspecialmente para diluir anticorpos enzimáticos.
Solução de SubstratoComo o substrato TMB, ele pode reagir com o HRP no anticorpo enzimático, gerando mudanças de cor.
Liquido de lavagemGeralmente é um líquido concentrado, diluído em uma certa proporção com água destilada ou água deionizada para lavar placas enzimáticas, remover substâncias não ligadas e reduzir a interferência de fundo.
Liquido de terminaçãoA maioria das soluções ácidas fortes (como ácido sulfúrico) são usadas para terminar a reação de coloração do substrato, tornando a cor do líquido reativo estável e fácil de ler.
Filme de vedação: Cobrir placas enzimáticas durante o processo de termocultivo para evitar a evaporação do líquido e a poluição externa.
Manual de instruçõesDescrição detalhada do uso do kit, precauções, indicadores de desempenho, etc.
Requisitos de amostra
O soroDepois da coleta de sangue, coloque a temperatura ambiente durante 2 horas ou 4 ° C durante a noite, em seguida, centrífuge a 1000 x g por 20 minutos para remover a limpeza de reposição. A coleta de sangue deve ser feita usando um equipamento descartável sem termogênio ou endotoxinas.
Plasma sanguíneoPode-se usar o ácido tetraacetico (EDTA), hepatina, etc. como anticoagulante. Depois de 30 minutos após a coleta da amostra, centrifuge a 1.000 x g durante 15 minutos a 2 - 8 ° C para remover a limpeza.
Cultura de célulasDepois de remover os fragmentos celulares e as impurezas, centrifugar a cultura celular com 1000 x g durante 20 minutos e remover a depuração para a detecção.
Organização homogêneaEnxague o tecido com tampão de fosfato pré-refrigerado (PBS, 0,01 M, pH = 7,4) para remover o sangue residual. Depois de cortar o tecido, adicionar PBS em uma proporção de aproximadamente 1:9 (w/v) e moer completamente no gelo. Depois de centrifugar 5000 x g por 5 a 10 minutos, retire o limpo para a detecção.
Se a amostra for detectada a curto prazo após a coleta, pode ser conservada a 4 ° C; Se for necessário conservar por um longo tempo, deve ser colocado a -20 ° C ou -80 ° C para congelar, e para evitar a fusão repetida, as amostras hematológicas geralmente não são adequadas para o teste.
Processo operacional
PreparaçãoRetire o kit do frigorífico e equilibre-o a temperatura ambiente 30 minutos antes. Ao mesmo tempo, dilua o líquido de lavagem concentrado com água destilada ou água desionizada de acordo com a proporção necessária.
Adicionando: Defina buracos em branco, buracos padrão e buracos de amostra. O buraco em branco é adicionado à amostra xi, o buraco padrão é adicionado a diferentes concentrações de produtos padrão, o buraco da amostra é adicionado à amostra tratada, a quantidade de amostra por buraco é geralmente de 100 μL, misturada suavemente e cultivada a temperatura de 37 ° C por 90 minutos.
lavagemApós o término da temperação, descarte o líquido dentro do buraco, preencha os buracos com líquido de lavagem, encha-os por 1 a 2 minutos e seque-os, repita a lavagem 5 vezes para garantir que o fundo limpe a substância não ligada.
Anticorpos enzimáticosAdicione 100 μL de fluido de trabalho de anticorpos enzimáticos bem diluídos a cada poço e mantenha a temperatura a 37 ° C por 60 minutos.
lavar novamente.Repita as etapas de lavagem acima.
Visualização de coresAdicione 90 μL de solução de substrato a cada orifício, misture suavemente e mantenha a cor a 37 ° C durante 15 a 30 minutos (de acordo com a cor real).
Terminar a reaçãoAdicione 50 μL de terminante a cada orifício e a cor da solução muda de azul para amarelo.
LeiturasMedir a absorção (OD) de cada orifício a um comprimento de onda de 450 nm dentro de 15 minutos após a adição do líquido final.
Calcular os resultadosLeve a concentração padrão como coordenada horizontal e o valor OD como coordenada longitudinal, desenhe a curva padrão. De acordo com o valor de OD da amostra para determinar a concentração correspondente da curva padrão, se a amostra for diluída, é necessário multiplicar o múltiplo de diluição correspondente para obter a concentração real.
