Interfina-6 Kit de Elisa

Interfina-6 Kit de Elisa

Interfina-6 Kit de ElisaÉ uma ferramenta para a detecção quantitativa do teor de interferina-6 em amostras biológicas e é amplamente utilizada em áreas de pesquisa científica como imunologia e pesquisa inflamatória. Aqui está a sua apresentação:

1. Princípio de testeTecnologia de ELISA de clamping de anticorpos duplos. A placa enzimática no kit foi pré-embalada com anticorpos específicos anti-IL-6. Após a adição da amostra, a IL-6 na amostra se liga à especificidade dos anticorpos de fase sólida para formar um complexo antígeno-anticorpo. Anticorpos anti-IL-6 marcados por enzimas são adicionados, que se ligam ainda mais à IL-6 ligada ao anticorpo de fase sólida, formando uma estrutura de clamp de "anticorpo de fase sólida - IL-6 - anticorpo marcado por enzimas". Após a etapa de lavagem, remova a substância não ligada e adicione a solução de substância (por exemplo, TMB). Sob a catálise enzimática, o substrato tem uma reação de coloração, com a cor profunda proporcional ao teor de IL-6 na amostra. Medindo a absorção em comprimentos de onda específicos (geralmente 450 nm) por meio de um calibrador enzimático, a concentração de IL-6 na amostra pode ser calculada em comparação com a curva padrão.

2. Composição do Kit

• Placa enzimáticaExistem especificações de 96 ou 48 buracos, pré-embalados com anticorpos anti-IL-6 que são veículos da reação.

• Produtos padrãoGeralmente são refrigerados, geralmente com duas garrafas. A diluição padrão é necessária antes da administração e diluída em diferentes gradientes de concentração, como 0, 15,6, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg / mL, etc., para desenhar curvas padrão.

• amostra xi liberaçãoUsado para diluir amostras a serem testadas com concentrações excessivas para garantir que a concentração da amostra esteja dentro da faixa de detecção do kit.

• Anticorpos enzimáticosO anticorpo anti-IL-6 marcado por HRP é um líquido concentrado que precisa ser diluído usando um diluído de anticorpo marcado por enzimas.

• Dilução de anticorpos enzimáticosEspecialmente para diluir anticorpos enzimáticos.

• Solução de SubstratoComo o substrato TMB, a reação com o HRP no anticorpo enzimático produz mudanças de cor.

• Liquido de lavagemA maioria é um líquido concentrado, o uso deve ser diluído proporcionalmente com água destilada ou água deionizada para lavar placas enzimáticas, remover substâncias não ligadas e reduzir a interferência de fundo.

• Liquido de terminaçãoGeralmente uma solução ácida forte (como ácido sulfúrico), usada para terminar a reação de coloração do substrato, tornando a cor do líquido reativo estável e fácil de ler.

• Filme de vedação: Cobrir placas enzimáticas durante o processo de termocultivo para evitar a evaporação do líquido e a poluição externa.

• Manual de instruçõesDescrição detalhada do uso do kit, precauções, indicadores de desempenho, etc.

3. Requisitos de amostra

• O soroDepois da coleta de sangue, coloque a temperatura ambiente por 2 horas ou 4 ° C durante a noite, centrífuga 1000 x g por 20 minutos e retire o repositório limpo. A coleta de sangue deve ser feita usando um equipamento descartável sem termogênio ou endotoxinas.

• Plasma sanguíneoÁcido dietamina tetracético (EDTA), hepatina e outros anticoagulantes disponíveis. Depois de 30 minutos após a coleta da amostra, centrifuge 1000 x g durante 15 minutos a 2 - 8 ° C para remover a limpeza.

• Cultura de célulasCultura celular: centrifugar 1000 x g de limpeza por 20 minutos, depois de remover os fragmentos celulares e impurezas, remover a limpeza para a detecção.

• Organização homogêneaEnxague o tecido com tampão de fosfato pré-refrigerado (PBS, 0,01 M, pH = 7,4) para remover o sangue residual. Depois de cortar o tecido, pressione 1:9 (w/v) para adicionar PBS e moer completamente no gelo. Depois de centrifugar 5000 x g por 5 a 10 minutos, retire o limpo para a detecção.

• Se a amostra for detectada a curto prazo após a coleta, pode ser conservada a 4 ° C; Se for necessário conservar por um longo tempo, deve ser colocado a -20 ° C ou -80 ° C para congelar, e para evitar a fusão repetida, as amostras hematológicas geralmente não são adequadas para o teste.

4. Processo operacional

• PreparaçãoRetire o kit do frigorífico e equilibre a temperatura ambiente 30 minutos antes. Ao mesmo tempo, dilua o líquido de lavagem concentrado com água destilada ou água desionizada de acordo com a proporção necessária.

• Adicionando: Defina buracos em branco, buracos padrão e buracos de amostra. O buraco em branco é adicionado à amostra xi, o buraco padrão é adicionado a diferentes concentrações de produtos padrão, o buraco da amostra é adicionado à amostra tratada, a quantidade de amostra por buraco é geralmente de 100 μL, misturada suavemente e cultivada a temperatura de 37 ° C por 90 minutos.

• lavagemApós o término da temperação, descarte o líquido dentro do buraco, preencha os buracos com líquido de lavagem, encha-os por 1 a 2 minutos e seque-os, repita a lavagem 5 vezes para garantir que o fundo limpe a substância não ligada.

• Anticorpos enzimáticosAdicione 100 μL de fluido de trabalho de anticorpos enzimáticos bem diluídos a cada poço e mantenha a temperatura a 37 ° C por 60 minutos.

• lavar novamente.Repita as etapas de lavagem acima.

• Visualização de coresAdicione 90 μL de solução de substrato a cada orifício, misture suavemente e mantenha a cor a 37 ° C durante 15 a 30 minutos (de acordo com a cor real).

• Terminar a reaçãoAdicione 50 μL de terminante a cada orifício e a cor da solução muda de azul para amarelo.

• LeiturasMedir a absorção (OD) de cada orifício a um comprimento de onda de 450 nm dentro de 15 minutos após a adição do líquido final.

• Calcular os resultadosLeve a concentração padrão como coordenada horizontal e o valor OD como coordenada longitudinal, desenhe a curva padrão. De acordo com o valor de OD da amostra para determinar a concentração correspondente da curva padrão, se a amostra for diluída, é necessário multiplicar o múltiplo de diluição correspondente para obter a concentração real.

5. Indicadores de desempenho

• Alcance da detecçãoDiferentes kits variam, com uma faixa de detecção comum de 15,6 a 1000 pg/mL, para atender às necessidades de detecção de conteúdo de IL-6 em várias amostras.

• sensibilidadeNormalmente, até 7,8 pg/mL ou menos podem detectar traces de IL-6 na amostra.

• EspecificaçãoÉ altamente específico para IL-6, com quase nenhuma reação cruzada com outras substâncias, como citocinas.

• RepetibilidadeO fator de variação dentro da placa é geralmente inferior a 10% e o fator de variação entre placas é inferior a 15%, garantindo a estabilidade e confiabilidade dos resultados de teste.