Interfina-7 Kit de Elisa

Interfina-7 Kit de Elisa

Interfina-7 Kit de ElisaÉ uma ferramenta de teste comumente usada na pesquisa científica para medir quantitativamente o teor de interferina-7 em amostras biológicas. A interferina-7 é uma proteína secretora solúvel de tamanho 25kDa codificada pelo gene IL-7 e pertence à família de fatores hematopoiéticos que desempenham um papel fundamental na diferenciação, proliferação e sobrevivência dos linfocitos. O kit pode ajudar a investigação sobre mecanismos de doenças e desenvolvimento de medicamentos.

1. Composição do Kit

• Placa enzimática96 ou 48 orifícios foram pré-embalados com anticorpos anti-IL-7 como veículos de resposta.

• Produtos padrãoNormalmente são refrigerados, geralmente têm duas garrafas. Antes da administração, é necessário usar um diluído padrão para a dissolução e diluir em diferentes gradientes de concentração, como 0, 15,6, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg / mL, etc., para desenhar a curva padrão.

• amostra xi liberaçãoUsado para diluir amostras a serem testadas com concentrações excessivas para garantir que suas concentrações estejam dentro da faixa de detecção eficaz do kit.

• Anticorpos enzimáticosO anticorpo anti-IL-7 marcado por HRP é um líquido concentrado, que deve ser diluído com um diluído de anticorpo baseado em enzimas de acordo com os requisitos.

• Dilução de anticorpos enzimáticosEspecialmente para diluir anticorpos enzimáticos.

• Solução de SubstratoComo o substrato TMB, ele pode reagir com o HRP no anticorpo enzimático, gerando mudanças de cor.

• Liquido de lavagemGeralmente é um líquido concentrado, diluído com água destilada ou água deionizada em proporções específicas, usado para lavar placas enzimáticas, remover substâncias não ligadas e reduzir eficazmente a interferência de fundo.

• Liquido de terminaçãoA maioria das soluções ácidas fortes (como ácido sulfúrico) são usadas para terminar a reação de coloração do substrato, tornando a cor do líquido reativo estável e facilitando a leitura posterior.

• Filme de vedação: Utilizado para cobrir placas enzimáticas durante o processo de incubação térmica para evitar a evaporação do líquido e a poluição externa.

• Manual de instruçõesDescrição detalhada do uso do kit, precauções, indicadores de desempenho, etc.

2. Requisitos de amostra

• O soroDepois da coleta de sangue, coloque a temperatura ambiente durante 2 horas ou 4 ° C durante a noite, em seguida, centrífuge a 1000 x g por 20 minutos e absorva cuidadosamente o soro de reposição. A coleta de sangue deve ser feita usando um equipamento descartável sem termogênio ou endotoxinas.

• Plasma sanguíneoPode-se usar o ácido tetraacetico (EDTA), hepatina, etc. como anticoagulante. Depois de 30 minutos após a coleta da amostra, centrifuge a 1.000 x g durante 15 minutos a 2 - 8 ° C para remover a limpeza.

• Cultura de célulasDepois de remover os fragmentos celulares e as impurezas, centrifugar a cultura celular com 1000 x g durante 20 minutos e remover a depuração para a detecção.

• Organização homogêneaEnxague o tecido com tampão de fosfato pré-refrigerado (PBS, 0,01 M, pH = 7,4), removendo o sangue residual do fundo. Depois de cortar o tecido, adicionar PBS em uma proporção de aproximadamente 1:9 (w/v) e moer completamente no gelo. Depois de centrifugar 5000 x g por 5 a 10 minutos, retire o limpo para a detecção.

• Se a amostra for testada em curto prazo após a coleta, pode ser conservada a 4 ° C; Se for necessário conservar por um longo tempo, deve ser colocado a -20 ° C ou -80 ° C para congelar, e para evitar a fusão repetida, as amostras hematológicas geralmente não são adequadas para a detecção.

3. Processo operacional

• PreparaçãoRetire o kit do frigorífico e equilibre-o a temperatura ambiente 30 minutos antes. Ao mesmo tempo, dilua o líquido de lavagem concentrado com água destilada ou água desionizada de acordo com a proporção necessária.

• Adicionando: Defina buracos em branco, buracos padrão e buracos de amostra. O buraco em branco é adicionado à amostra xi, o buraco padrão é adicionado a diferentes concentrações de produtos padrão, o buraco da amostra é adicionado à amostra tratada, a quantidade de amostra por buraco é geralmente de 100 μL, misturada suavemente e cultivada a temperatura de 37 ° C por 90 minutos.

• lavagemApós o término da temperação, descarte o líquido dentro do buraco, preencha os buracos com líquido de lavagem, encha-os por 1 a 2 minutos e seque-os, repita a lavagem 5 vezes para garantir que o fundo limpe a substância não ligada.

• Anticorpos enzimáticosAdicione 100 μL de fluido de trabalho de anticorpos enzimáticos bem diluídos a cada poço e mantenha a temperatura a 37 ° C por 60 minutos.

• lavar novamente.Repita as etapas de lavagem acima.

• Visualização de coresAdicione 90 μL de solução de substrato a cada orifício, misture suavemente e mantenha a cor a 37 ° C durante 15 a 30 minutos (de acordo com a cor real).

• Terminar a reaçãoAdicione 50 μL de terminante a cada orifício e a cor da solução muda de azul para amarelo.

• LeiturasMedir a absorção (OD) de cada orifício a um comprimento de onda de 450 nm dentro de 15 minutos após a adição do líquido final.

• Calcular os resultadosLeve a concentração padrão como coordenada horizontal e o valor OD como coordenada longitudinal, desenhe a curva padrão. De acordo com o valor de OD da amostra para determinar a concentração correspondente da curva padrão, se a amostra for diluída, é necessário multiplicar o múltiplo de diluição correspondente para obter a concentração real.

4. Indicadores de desempenho

• Alcance da detecçãoDiferentes kits variam, com uma faixa de detecção comum de 15,6 a 1000 pg/mL, para atender às necessidades de detecção do conteúdo de IL-7 em várias amostras.

• sensibilidadeNormalmente, até 7,8 pg/mL ou menos podem detectar traces de IL-7 na amostra.

• EspecificaçãoÉ altamente específico para IL-7, com quase nenhuma reação cruzada com outras substâncias, como citocinas.

• RepetibilidadeO fator de variação dentro da placa é geralmente inferior a 10% e o fator de variação entre placas é inferior a 15%, garantindo a estabilidade e confiabilidade dos resultados de teste.