ELISA KIT para o receptor de interferina 7 (solúvel)

ELISA KIT para o receptor de interferina 7 (solúvel)

ELISA KIT para o receptor de interferina 7 (solúvel)É uma ferramenta para a detecção quantitativa do teor de receptores solúveis de interfeína 7 em amostras biológicas e é amplamente utilizado em áreas como a pesquisa imunológica.

1. Princípio de testeUtilização do método ELISA de duplo anticorpo. A placa microporosa na caixa foi pré-embalada com anticorpos específicos contra o receptor solúvel de interferina 7. Quando a amostra é adicionada, o receptor solúvel de interferina 7 na amostra se liga a anticorpos de fase sólida. Em seguida, é adicionado um anticorpo marcado enzimáticamente para o receptor anti-interfeína 7 solúvel, que formará um complexo "anticorpo de fase sólida - receptor interfeína 7 solúvel - anticorpo marcado enzimáticamente" com o receptor ligado à fase sólida. Depois das etapas de lavagem, a substância não ligada é removida e a solução de substrato (por exemplo, TMB) é adicionada e, sob a catalisação da enzima, o substrato reage com a coloração e a cor é proporcional ao teor de receptores solúveis de interferina 7 na amostra. Medindo a absorção a um comprimento de onda específico (geralmente 450 nm) com um calibre enzimático, comparado com a curva padrão, a concentração desse receptor na amostra pode ser calculada.

2. Composição do Kit

• Placa enzimática96 ou 48 orifícios, pré-embalados com anticorpos anti-solúveis do receptor de interfeína 7, são veículos da reação.

• Produtos padrãoNormalmente são refrigerados, com duas garrafas. Antes da administração, diluição padrão é necessária para dissolver e diluir em diferentes gradientes de concentração, como 0, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg / mL, etc., para desenhar curvas padrão.

• amostra xi liberaçãoUsado para diluir as amostras a serem testadas com concentrações excessivas para garantir que suas concentrações estejam dentro da faixa de detecção do kit.

• Anticorpos enzimáticos: ou seja, o anticorpo anti-solúvel do receptor de interferina 7 marcado por HRP, é um líquido concentrado, diluído com anticorpo enzimático conforme exigido.

• Dilução de anticorpos enzimáticosEspecialmente para diluir anticorpos enzimáticos.

• Solução de SubstratoComo o substrato TMB, ele pode reagir com o HRP no anticorpo enzimático para produzir mudanças de cor.

• Liquido de lavagemGeralmente é um líquido concentrado, diluído proporcionalmente com água destilada ou água deionizada para lavar placas enzimáticas, remover substâncias não ligadas e reduzir a interferência de fundo.

• Liquido de terminaçãoA maioria das soluções ácidas fortes (como ácido sulfúrico) são usadas para terminar a reação de coloração do substrato, tornando a cor do líquido reativo estável e fácil de ler.

• Filme de vedação: Utilizado para cobrir placas enzimáticas durante o processo de incubação térmica para evitar a evaporação do líquido e a poluição externa.

• Manual de instruçõesDescrição detalhada do uso do kit, precauções, indicadores de desempenho, etc.

3. Requisitos de amostra

• O soroDepois da coleta de sangue, coloque a temperatura ambiente por 2 horas ou 4 ° C durante a noite, centrífuga 1000 x g por 20 minutos e retire o repositório limpo. A coleta de sangue deve ser feita usando um equipamento descartável sem termogênio ou endotoxinas.

• Plasma sanguíneoDisponível com anticoagulantes como EDTA e hepatina. Dentro de 30 minutos após a coleta da amostra, centrífuga 1000 x g a 2 - 8 ° C por 15 minutos para remover a limpeza.

• Cultura de célulasCultura celular: centrifugar 1000 x g de limpeza por 20 minutos e remover a limpeza após a remoção de fragmentos celulares e impurezas.

• Organização homogêneaEnxague o tecido com PBS pré-refrigerado, remova o sangue residual, depois de cortar o tecido, pressione 1:9 (w/v) para adicionar PBS e moe completamente no gelo. Depois de centrifugar 5000 x g por 5 a 10 minutos, retire o limpo para a detecção.

• Se a amostra for detectada a curto prazo após a coleta, pode ser conservada a 4 ° C; Se conservado por um longo tempo, é necessário congelar a -20 ° C ou -80 ° C, e evitar a fusão repetida, as amostras hemolíticas geralmente não são adequadas para o teste.

4. Processo operacional

• PreparaçãoRetire a caixa do frigorífico e equilibre até a temperatura ambiente (cerca de 30 minutos). Diluir o líquido de lavagem concentrado.

• Adicionando: Defina buracos em branco, buracos padrão e buracos de amostra. O buraco em branco adiciona a amostra xi, o buraco padrão adiciona a amostra padrão de diferentes concentrações, o buraco da amostra adiciona a amostra tratada, a quantidade de amostra por buraco é geralmente de 100 μL, misturada suavemente e cultivada a temperatura de 37 ° C por 90 minutos.

• lavagemElimine o líquido no buraco, preencha os buracos com líquido de lavagem, banhe-os por 1 a 2 minutos e seque-os, repita a lavagem 5 vezes para garantir que a substância não ligada seja limpa.

• Anticorpos enzimáticosAdicione 100 μL de fluido de trabalho de anticorpos enzimáticos bem diluídos a cada poço e mantenha a temperatura a 37 ° C por 60 minutos.

• lavar novamente.Siga as etapas de lavagem acima.

• Visualização de coresAdicione 90 μL de solução de substrato a cada orifício, misture suavemente e mantenha a cor a 37 ° C durante 15 a 30 minutos (de acordo com a cor real).

• Terminar a reaçãoAdicione 50 μL de terminante a cada orifício e a cor da solução muda de azul para amarelo.

• LeiturasMedir a absorção (OD) de cada orifício a um comprimento de onda de 450 nm dentro de 15 minutos após a adição do líquido final.

• Calcular os resultadosLeve a concentração padrão como coordenada horizontal e o valor OD como coordenada longitudinal, desenhe a curva padrão. De acordo com o valor de OD da amostra para determinar a concentração correspondente da curva padrão, se a amostra for diluída, é necessário multiplicar o múltiplo de diluição correspondente para obter a concentração real.

5. Indicadores de desempenho

• Alcance da detecçãoO intervalo comum é de 31,2 a 2000 pg/mL, para atender às necessidades de detecção do conteúdo solúvel do receptor de interferina 7 em várias amostras.

• sensibilidadePode ser tão baixo quanto 15,6 pg/mL ou mesmo menos para detectar traces desse receptor na amostra.

• EspecificaçãoÉ altamente específico para o receptor de interfeína 7 solúvel e não tem reações cruzadas significativas com outras substâncias, como os receptores de citoquinas.

• RepetibilidadeO fator de variação dentro da placa é geralmente inferior a 10% e o fator de variação entre placas é inferior a 15%, garantindo a estabilidade e confiabilidade dos resultados de teste.

6. Atenção

• De acordo estritamente com as instruções, os diferentes lotes de reagentes do kit não podem ser misturados.

• Usar uma sucção única durante a operação para evitar a poluição cruzada e a amostragem é precisa.

• A lavagem adequada é a chave para garantir que os resultados sejam precisos, e as placas não podem levar facilmente a falsos positivos.

• A solução de substrato é sensível à luz, necessita de conservação e uso de proteção contra a luz, a reação de exibição de cor deve ser realizada em condições de proteção contra a luz.

• O líquido de terminação é corrosivo, cuidado com a proteção durante a operação, evitando o contato com a pele e os olhos.

• Recomenda-se que tanto os padrões quanto as amostras façam testes de perfuração composta para melhorar a precisão dos resultados. O kit é usado apenas para pesquisa científica e não pode ser usado para diagnóstico clínico.