O KIT de ELISA do receptor de interferina-6 (solúvel), usando o método de ELISA anti-clamp duplo, quantificando exatamente o soro e outros receptores solúveis em amostras, fácil de operar e amplamente utilizado na pesquisa científica.
ELISA KIT (Solúvel) do Receptor Interferina-6
ELISA KIT (Solúvel) do Receptor Interferina-6Projetado para a detecção quantitativa do conteúdo de receptores solúveis de interfeína-6 em amostras biológicas, é de grande importância para a investigação imunológica e inflamatória no campo da pesquisa científica.
Princípio de teste: com base no método de imunosorbenção ligada a bicorpos. A placa enzimática pré-embalada é dirigida a anticorpos específicos para o receptor interfeína-6 solúvel. Após a adição da amostra, o receptor interfeína-6 solúvel se liga a anticorpos de fase sólida. Em seguida, os anticorpos anti-interfeína-6 receptores marcados por enzimas são adicionados para formar o complexo "anticorpos de fase sólida-interfeína-6 receptores-anticorpos marcados por enzimas". Depois de lavar, remover o não ligado, adicionar uma solução de substrato (por exemplo, TMB) e colorir o substrato sob catalisação enzimática, a cor é proporcional ao conteúdo desse receptor na amostra. Medir a absorção de luz em comprimento de onda de 450 nm por meio de um calibrador enzimático, em comparação com a curva padrão para obter a concentração do receptor interfeína solúvel-6 na amostra.
Composição do Kit
Placa enzimáticaExistem especificações de 96 ou 48 buracos, pré-embalados com anticorpos como veículos de reação.
Produtos padrãoNormalmente, para produtos congelados, é necessário diluir o líquido padrão e diluir em uma série de gradientes de concentração, como 0, 15,6, 31,2, 62,5, 125, 250, 500, 1000 pg / mL, para desenhar curvas padrão.
amostra xi liberaçãoUsado para diluir amostras de alta concentração para adaptar a concentração da amostra à faixa de teste do kit.
Anticorpos enzimáticos: ou seja, o anticorpo anti-solúvel do receptor de interfeína-6 marcado com HRP, é um líquido concentrado, que precisa ser diluído com um anticorpo enzimático diluído conforme necessário.
Dilução de anticorpos enzimáticosEspecialmente para diluir anticorpos enzimáticos.
Solução de SubstratoComo o substrato TMB, a reação da HRP com anticorpos enzimáticos produz mudanças de cor.
Liquido de lavagemGeralmente é um líquido concentrado, diluído proporcionalmente com água destilada ou água deionizada, usado para lavar placas enzimáticas, remover substâncias não ligadas e reduzir a interferência de fundo.
Liquido de terminaçãoA maioria das soluções ácidas fortes (como ácido sulfúrico) são usadas para terminar a reação de coloração do substrato e estabilizar a cor do líquido reativo para leitura.
Filme de vedação: Cobre a placa enzimática durante a criação térmica para evitar a evaporação do líquido e a poluição externa.
Manual de instruçõesDescrição detalhada do uso, precauções, indicadores de desempenho, etc.
Requisitos de amostra
O soroDepois da coleta de sangue, coloque-o a temperatura ambiente durante 2 horas ou 4 ° C durante a noite, centrífuga de 1000 x g durante 20 minutos, a coleta de sangue requer um equipamento descartável sem termogênio e sem endotoxinas.
Plasma sanguíneo: Disponível com EDTA, hepatina e outros anticoagulantes, dentro de 30 minutos após a coleta de amostras, a centrifugação de 1000 x g a 2 - 8 ° C durante 15 minutos.
Cultura de células1.000 x g: centrífuga durante 20 minutos para remover os fragmentos celulares e as impurezas após a remoção do teste de limpeza.
Organização homogêneaEnxague o tecido com PBS pré-refrigerado (0,01 M, pH = 7,4), remova o sangue residual, depois de cortar o tecido, pressione 1:9 (w / v) para adicionar PBS, moe completamente no gelo e centrifuge 5000 x g durante 5 - 10 minutos para remover a limpeza.
Se a amostra for detectada a curto prazo após a coleta, pode ser conservada a 4 ° C; A conservação a longo prazo requer congelamento de -20 ° C ou -80 ° C, e evitar a fusão repetida, amostras hemolíticas geralmente não são adequadas para o teste.
Processo operacional
PreparaçãoRetire o kit do frigorífico, equilibre até temperatura ambiente (cerca de 30 minutos) e dilua o líquido de lavagem concentrado.
AdicionandoEstabeleça buracos em branco, buracos padrão e buracos de amostra. O orificio vazio com a amostra xi liberação, orificio padrão com a amostra padrão de concentração diferente, orificio de amostra com a amostra bem tratada, cada orificio com a amostra geralmente 100 μL, misturar suavemente, 37 ° C temperatura durante 90 minutos.
lavagemElimine o líquido dentro dos orifícios, encha os orifícios com líquido de lavagem, banhe-os por 1 a 2 minutos e seque-os, repita a lavagem 5 vezes para garantir a limpeza das substâncias não ligadas.
Anticorpos enzimáticos: 100 μL de fluido de trabalho de anticorpos enzimáticos bem diluído por cubo, 37 ° C durante 60 minutos.
lavar novamente.Repita as etapas de lavagem acima.
Visualização de coresAdicione 90 μL de solução de substrato por orifício, misture suavemente e mantenha a cor a 37 ° C durante 15 a 30 minutos (de acordo com a cor real).
Terminar a reaçãoAdicione 50 μL de terminante por orifício e a cor da solução muda de azul para amarelo.
LeiturasNo prazo de 15 minutos após a adição do líquido final, medir a absorção dos orifícios (OD) em comprimentos de onda de 450 nm com um calibre enzimático.
Calcular os resultados: Use a concentração padrão como coordenada horizontal e o valor OD para desenhar a curva padrão para as coordenadas longitudinais. Determine a concentração correspondente a partir da curva padrão com base no valor de OD da amostra, e se a amostra for diluída, multiplique o múltiplo de diluição correspondente para obter a concentração real.
Indicadores de desempenho
Alcance da detecçãoO intervalo comum é de 15,6 a 1000 pg/mL, para atender a várias necessidades de teste de amostras.
SensibilidadePode ser tão baixo quanto 7,8 pg/mL ou mesmo menos para detectar traces de receptores solúveis de Interferon-6.
EspecificaçãoÉ altamente específico desse receptor, com quase nenhuma reação cruzada com outros receptores de citoquinas.
RepetibilidadeO fator de variação dentro da placa é geralmente inferior a 10%, o fator de variação entre as placas é inferior a 15%, para garantir que os resultados de teste sejam estáveis e confiáveis.
