Experimento Molecular Interação Molecular: Experimento de Bloqueamento de Migração de Gel EMSA

I. Introdução técnica

Tecnologia EMSA, ou Experimento de Migração de Gel ou Eletroforese, para estudar as interações das proteínas de ligação de DNA / RNA e suas sequências de ligação de DNA / RNA associadas;

II. Princípios técnicos

Incubando proteínas purificadas ou linfocitos coagulados com sondas de DNA ou RNA marcadas, em eletroferese em gel de poliacrilamida não degenerada, a taxa de migração de DNA-proteína ou complexo de RNA-proteína é mais lenta do que a sonda não ligada, detectando o fator de transcrição ou regulador de proteínas ativadas ligadas ao DNA ou RNA.

III. Aplicações

Estudo de regulação da expressão genética: determinar o local e as propriedades de ligação dos fatores de transcrição ao DNA e estudar o mecanismo de regulação da expressão genética.

Pesquisa do mecanismo da doença: analisar a regulação anormal da expressão de genes relacionados com a doença e explorar o mecanismo de ocorrência e desenvolvimento da doença.

Detecção de alvos de medicamentos: triagem e identificação de proteínas ligadas ao DNA relacionadas à doença para fornecer alvos para pesquisa e desenvolvimento de medicamentos.

Estudo da via de sinalização: Estudo das mudanças na atividade das proteínas de ligação ao DNA na via de sinalização e seus efeitos sobre os genes a jusante.

Vantagens técnicas

A operação experimental é relativamente simples e as condições experimentais não são exigentes.

Pode detectar vários tamanhos e estruturas de moléculas de ácidos nucleicos e uma ampla gama de tamanhos de proteínas, para detectar a ligação de diferentes proteínas e diferentes moléculas de ácidos nucleicos em um único sistema de reação.

A sonda de marcação de biotina é estável, segura, precisa e de alta afinidade.

V. Tipo de amostra

Células frescas (células adesivas / células em suspensão), células congeladas, tecidos congelados, amostras de nucleoproteínas celulares ou fatores de transcrição purificados, algumas experiências também podem usar proteínas com expressão recombinante.

Necessidades de amostras

amostras de células: cerca de 1 x 10 ^ 7 (pode ser um prato de 10 cm ou armazenado em uma sonda centrífuga na forma de células em suspensão, ou uma garrafa T75);

Congelação de tecidos: cerca de 400 mg;

Tecido vegetal: cerca de 2g; nucleoproteína celular, fatores de transcrição purificadores, proteínas de expressão recombinante, etc.: fornecer pelo menos 50ul por membrana, a concentração não inferior a 0,5mg / ml.

Preparação da amostra e transporte

amostras de células vivas: a distância mais próxima pode ser mantida no prato / garrafa T75 / tubo centrífugo amostras de células frescas de temperatura normal express (chegada no dia seguinte mais tardar) transporte, a cidade pode ser entregue ou pessoalmente, a distância mais longa, pode congelar as células de gelo seco transporte -80 ℃;

Amostras de tecido e outras amostras líquidas: -80 ° C congelado para transporte de gelo seco.

Reagentes necessários

Anticorpos específicos ligados a proteínas acima de 50 ul, concentrações superiores a 0,5 mg / ml.

9. Ciclo experimental

2-3 semanas

X. Outros

Sequência da sonda Se não houver sequência da sonda, forneça informações ou literatura relacionadas com a proteína de ligação ao DNA.