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Endereço
No. 307, Edifício de Ciência e Tecnologia Huaxia, 8, Parque de Software Zhongguan, Haidian, Pequim
Categorias do produto
Pequim Lambolde Comércio Co., Ltd.
Trizol pal extractor de ácido nucleico
NegociávelAtualização em05/06
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Visão geral
Trizol Pal Nucleic Acid Extractor Substituto cloroformílico usado para a extração de RNA. O trizol pal pode ser usado em combinação com o Reagente Trizol (n.º: R1000) para substituir o cloroformo por extração repetida do sistema de fissão para remover proteínas e é amplamente utilizado para extrair RNA total de amostras de tecidos animais, materiais vegetais, vários micróbios e células em cultura. As amostras são totalmente fissuradas em Trizol, ao mesmo tempo em que a integridade do RNA é garantida ao máximo.
Detalhes do produto
Trizol pal cloroformílico para extração de RNANúmero do produto: R1200
Condições de armazenamento: 0-30 ℃ para guardar à luz
Trizol pal cloroformílico para extração de RNADescrição do produto:
O Trizol PAL, que pode ser usado em combinação com o Reagente Trizol (n.º R1000) em vez do cloroformo, extrai repetidamente o sistema de fissão para remover proteínas e é amplamente utilizado para extrair RNA total de amostras de tecidos animais, materiais vegetais, vários micróbios e células em cultura. As amostras são totalmente fissuradas em Trizol, ao mesmo tempo em que a integridade do RNA é garantida ao máximo. Após a adição de centrifugação Trizol PAL, a solução é dividida em três camadas: a fase aquática incolora superior, a camada média e a fase orgânica vermelha inferior, com o RNA distribuído na camada limpa superior. Após a coleta da camada superior, o RNA total pode ser recuperado por precipitação de isopropanol. A extração de RNA total é de boa integridade, livre de proteínas e poluição de DNA e pode ser usada em vários experimentos convencionais de biologia molecular, como: RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、 tradução externa, etc.
Reagentes próprios
Reagente Trizol (n.º R1000), isopropanol, etanol 75%, água sem RNase (para ARN recém-aberto ou extraído)
Extrator de ácido nucleicoPrecauções:
Para prevenir a contaminação com RNase, deve-se prestar atenção aos seguintes aspectos:
1) Use produtos de plástico e espingardas sem RNase para evitar a poluição cruzada.
2) Os utensílios de vidro devem ser assados a secar a alta temperatura de 180 ° C por 4h antes de serem usados, e os utensílios de plástico podem ser mergulhados em NaOH 0,5 M por 10 minutos e esterilizados por alta pressão após lavagem com água chedi.
3) A solução de formulação deve usar água sem RNase.
4) O operador usa máscaras e luvas descartáveis e deve trocar as luvas durante o processo experimental.
As amostras extraídas evitam o congelamento repetido, caso contrário, afeta a taxa de extração de RNA e a qualidade.
Ao usar este produto, você deve usar itens de proteção, como luvas, máscaras, etc. Se por acaso entrar em contato com os olhos, deve ser lavado imediatamente com uma grande quantidade de água e ir ao hospital para tratamento. Mantenha-se longe de fogo e fontes de calor.
Depositação de RNA em 75% de etanol, 2-8 ° C pode ser mantida por uma semana e -20 ° C pode ser mantida por um ano.
A meia-vida do RNA é relativamente curta e fácil de degradar, recomenda-se que experimentos posteriores sejam realizados o mais rápido possível após a extração, como transcrição inversa em cDNA, Northern Blot, etc.
Se os experimentos downstream são muito sensíveis ao DNA, recomenda-se o tratamento do RNA com DNase I sem RNase.
Passos de operação:
1) Tratamento de vários materiais.
1.1 Tejido vegetal: tirar tecido vegetal fresco moído completamente em nitrogênio líquido ou moído rapidamente diretamente em Trizol após o corte do grupo de plantas zhi, adicionando 1 ml de Trizol a cada 30-50 mg de tecido e misturando.
Nota: o volume da amostra geralmente não deve exceder 10% do volume de Trizol.
1.2 Tejido animal: Tome tecido animal fresco ou congelado a -70 ° C para cortar o máximo, adicionando 1 mL de Trizol a cada 30-50 mg de tecido, para homologação com um homologador. Ou adicionar Trizol 1 mL depois de moer em nitrogênio líquido.
Nota: o volume da amostra geralmente não deve exceder 10% do volume de Trizol.
1.3 Células de cultura de camada única: absorver o líquido de cultura, adicionar uma quantidade moderada de Trizol diretamente na placa de cultura (1 mL de Trizol é necessário por área de 10 cm2) e soprar repetidamente com o amostrador para que as células se desintegram. Também disponível após o tratamento com a pancreatica baiase, transferir a solução celular para RNase-Free em um tubo de centrifugação, 300 x g de centrifugação para 5 min, recolher a precipitação celular, absorver cuidadosamente todo o líquido superior e adicionar Trizol 1 mL para misturar.
NOTA: 1) O número de células coletadas não deve exceder 1 x 10 7.
2) O aumento de TRNzol é determinado pela área da placa e não pelo número de células. Se a dose de Trizol for insuficiente, pode resultar em contaminação do DNA no RNA extraído.
3) É necessário remover a cultura celular limpa ao coletar as células, caso contrário, levará à fissão incompleta, causando uma redução do rendimento de RNA.
1.4 Suspensão celular: coleta centrífuga de células. Adicione 1 ml de Trizol a cada 5 x 10 6-1 x 10 7 células de animais, plantas e leveduras ou a cada 10 7 células bacterianas.
NOTA: 1) Não lavar as células antes de adicionar Trizol para evitar a degradação do RNA.
2) Algumas leveduras e células bacterianas podem precisar de um homogêmetro ou nitrogênio líquido.
1.5 Tratamento de sangue: extrair sangue fresco diretamente, adicionar 3 vezes o volume de Trizol (recomendado 0,25 mL de sangue inteiro com 0,75 mL de Trizol) e oscilar completamente.
1.6 Etapa opcional: Para amostras com alto teor de proteínas, gorduras, polisacárias ou substâncias extracelulares, como tecidos musculares, tecidos adiposos ou tubérculos de plantas, podem ser centrifugadas durante 10 minutos a 4 ° C, 12.000 rpm (~ 13.400 x g) após homologação para remover substâncias insolúveis, durante o qual o DNA contendo substâncias extracelulares, polisacárias e alto peso molecular é precipitado, enquanto o RNA está presente no soro superior.
2, adicionar Trizol à amostra e soprar repetidamente várias vezes, para que a amostra seja completamente fissurada. Coloque a temperatura ambiente por 5 minutos para que o complexo de ácido nucleico proteico seja completamente separado.
Adicione Trizol Pal à solução acima, adicione 0,2 mL de Trizol Pal a cada 1 mL de Trizol, tapa a tampa do tubo, oscile fortemente por 15 segundos e deixe a temperatura ambiente por 2-3 minutos.
4, 4 ° C 12.000 rpm durante 15 minutos, quando a amostra é dividida em três camadas: a fase orgânica vermelha, a camada média e a camada superior aquática incolor, com o RNA principalmente na fase aquática, transferindo a fase aquática (cerca de 600 μL) para um novo tubo de centrifugação livre de RNase (próprio).
Adicione isopropanol de igual volume na solução aquática obtida, misture invertidamente e coloque a temperatura ambiente por 10 minutos.
6, 4 ° C 12.000 rpm Centrífuga durante 10 minutos e descarte.
Adicionar 75% de etanol (preparado com água sem RNase) para lavar o precipitado. A precipitação é lavada com 1 mL de etanol 75% por cada 1 mL de Trizol usado.
8, 4 ° C 12.000 rpm centrífuga por 3 minutos, cuidadosamente absorver a limpeza superior, cuidado para não absorver a precipitação de RNA.
NOTA: A pequena quantidade de líquido restante pode ser centrifugada por um breve tempo e, em seguida, aspirada com a cabeça da pistola, tomando cuidado para não absorver o precipitado.
Deixe a temperatura ambiente por 2-3 minutos para secar. Adicionar 30-100 μL de água sem RNase para dissolver completamente o RNA, o RNA obtido é mantido a -70 ° C para evitar a degradação.
NOTA: A precipitação não deve secar demais para que não seja difícil de dissolver.
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