Acetildan-esterase (AchE）Instruções do kit de teste de atividade

Método Micrométrico 100T/96S

É necessário antes da determinação oficial 2-3 Uma amostra com maior diferença esperada para a previsãoDeterminação de significado:

AchE Pertence à hidrolisase do ácido sílico e está amplamente presente em vários tecidos e soros animais.AchE Alcali acetil catalizador (Ach）Hidrolítica, emdesempenha um papel importante na regulação da neurocondutividade.

Princípio de determinação:

AchECatáliseAchHidrólise para a geração de álcali dan, álcali dan e ácido di-sulfuro-paranitrobenzônico（DTNB）Geração do papel 5-Base-Ácido nitrobenzônico（TNB）； TNBem 412nmpico de absorção, através da medição de 412 nmTaxa de aumento da absorção, cálculo AchEAtividade.

Kit de teste de atividade da acetil-dan-esterase Série P450

Composição:

Reagente 3: pó×1 Branco,4℃Salvar. Inscrever-se antes da utilização 1.3 ml Reagente 2, dissolve completamente em choque.Reagente 4: pó×1 Branco,4℃Salvar. Inscrever-se antes da utilização 1.3 ml Reagente 2, dissolve completamente em choque.

Os parâmetros de um produto específico dependem dos parâmetros da descrição do produto recebida

Instrumentos e suprimentos próprios:

Espectrofotômetro visível/Calibrador enzimático, traço de quartzo/96 Placas furadas, centrífugas de baixa temperatura, panelas de banho de água, pistolas de pipeta ajustáveis e água destilada.

Enzima grosseiraExtração líquida：

1. Organização: de acordo com a qualidade da organização (g: um volume de reagente(ml)para 1：5~10proporção (Sugerição de aproximação 0.1gOrganização, Junte-se 1mlReagentesa) tomar banho de gelo,8000 g 4 ℃Centrífuga 10 minutosLeve o líquido para teste.

2. Bactérias, fungos: por número de células (10⁴ p): um volume de reagente (ml）para 500~1000：1 proporção (Recomendações 500 Milhões de célulasentrar 1ml Reagentes 1），Banho de gelo ultra-sônico de células quebradas (Potência 300wUltra-som. 3 Segundos, intervalo. 7 Segundos, tempo total 3 minutos）e então; 8000g， 4℃Centrífuga. 10 minutosColoque-o no gelo para teste.

3. Liquidos como soro: medição direta.

Operação de medição:

1. Espectrofotômetro/Preaquecimento do marcador enzimático 30 minAjustar o comprimento de onda para 412 nmA água destilada é zero.

2. O Reagente 2 é colocado 37℃Preaquecimento no banho 30 minutos。

3. Pegue um prato de quartzo em pequenas quantidades/96 Placa de buraco, adicionar em seguida 20 μllíquido,160 μlReagentes 2,10μl Reagentes 3 e 10μlReagente 4, mistura rápidaMuito bem.412nm Determinação local3 minutos Alterações no valor de absorção interna,10 anos Valor de absorção éA1， 第190s Valor de absorção éA2。△A Tubo de medição= A2-A1。 AchECálculo de atividade:

a.A fórmula de cálculo para medição com uma placa de quartzo em traços é a seguinte:

1. organizaçãoAchE Atividade

（1）Calculado de acordo com a concentração de proteínas

Definição de unidade de atividade: Produção catalítica por miligrama de proteína por minuto 1nmol TNB As enzimas são 1 uma unidade enzimática.

AchE Actividade enzimática(nmol/min/mg) prot)= (△A÷e÷d×V contra-geral×10⁹)÷（CPR × V Tipo）÷T

= 245×△A÷Cpr

（2）Calculado de acordo com a qualidade da amostra

Definição de unidade de atividade: geração catalítica por minuto por grama de tecido 1nmol TNB As enzimas são 1 uma unidade enzimática.

AchE Actividade enzimática(nmol / min / g) Pesado)= (△A÷e÷d×V contra-geral×10⁹)÷（W × V Tipo÷V Geral）÷T

=245×△A ÷ W

2. Bactérias, célulasAchE Atividade

Definição de unidade ativa: cada 10⁴ uma célula a cada minuto. 1nmol TNB As enzimas são 1 uma unidade enzimática.

AchE Actividade enzimática(nmol / min / 10)⁴ célula)= (△A÷e÷d×V contra-geral×10⁹)÷(Número de células)× V Tipo÷V Geral）÷T

=245×△A ÷Número de células

3. O soroAchE Atividade

Definição de unidade de atividade: produção catalítica por minuto por ml de soro 1nmol TNB As enzimas são 1 uma unidade enzimática.

AchE Actividade enzimática(nmol/min) /ml)= (△A÷e÷d×V contra-geral×10⁹÷V Tipo÷T

=245×△A

ε：TNBcoeficiente de amortiguação Moore,13.6×10³ L / mol / cm；d: Diâmetro da placa,3 cm；VVolume total do sistema de reação (L）， 200μl = 2 × 10^-4L；V Total da amostra: volume de líquido extraído,1 ml；10⁶：1mol = 1 × 10⁶μmol；CPRConcentração de proteínas (em mg/ml）；V Amostra: Adicionar o volume de líquido líquido superior (ml），0.02 ml；W Qualidade da amostra;TTempo de Reação (min），3 minutos。

b.usar 96 A fórmula de cálculo para a medição da placa é a seguinte:

1. organizaçãoAchE Atividade

（1）Calculado de acordo com a concentração de proteínas

Definição de unidade de atividade: Produção catalítica por miligrama de proteína por minuto 1nmol TNB As enzimas são 1 uma unidade enzimática.

AchE Actividade enzimática(nmol/min/mg) prot)= (△A÷e÷d×V contra-geral×10⁹)÷（CPR × V Tipo）÷T

= 490×△A÷Cpr

（2）Calculado de acordo com a qualidade da amostra

Definição de unidade de atividade: geração catalítica por minuto por grama de tecido 1nmol TNB As enzimas são 1 uma unidade enzimática.

AchE Actividade enzimática(nmol / min / g) Pesado)= (△A÷e÷d×V contra-geral×10⁹)÷（W × V Tipo÷V Geral）÷T

= 490×△A ÷ W

2. Bactérias, célulasAchE Atividade

Definição de unidade ativa: cada 10⁴ uma célula a cada minuto. 1nmol TNB As enzimas são 1 uma unidade enzimática.

AchE Actividade enzimática(nmol / min / 10)⁴ célula)= (△A÷e÷d×V contra-geral×10⁹)÷(Número de células)× V Tipo÷V Geral）÷T

=490×△A ÷Número de células

3. O soroAchE Atividade

Definição de unidade de atividade: produção catalítica por minuto por ml de soro 1nmol TNB As enzimas são 1 uma unidade enzimática.

AchE Actividade enzimática(nmol/min) /ml)= (△A÷e÷d×V contra-geral×10⁹÷V Tipo÷T

=490×△A

ε：TNB coeficiente de amortiguação Moore,13.6×10³ L / mol / cm；d：96 Diâmetro do furo,0.5 centímetros；V Volume total do sistema de reação (L）， 200μl = 2 × 10^-4L；VTotal da amostra: volume de líquido extraído,1 ml；10⁶：1mol = 1 × 10⁶μmol；CPRConcentração de proteínas (em mg/ml）；VAmostra: Adicionar o volume de líquido líquido superior (ml），0.02 ml；W Qualidade da amostra;TTempo de Reação (min），3 minutos。

Kit de teste de atividade da acetil-dan-esterase Série P450