Animina-4-hidroxidase (AH)Instruções do kit de teste de atividade

Método Micrométrico 100 tubo/48 Tipo

É necessário antes da determinação oficial 2-3 Uma amostra com maior diferença esperada para a previsãoDeterminação de significado:

CitocromaP450 Uma enzima é um grupo de isoenzimas que se encontram principalmente no fígado e desempenham um papel importante no metabolismo de substâncias estrangeiras, especialmente medicamentos e drogas.Metabolismo dos venenos.AH emP450 O sistema enzimático é equivalente aO CYP2E1 Subtipo,O CYP2E1 Não só está envolvido no metabolismo da droga, mas também cataliza maisprocesso de ativação de precancerógenos e pré-venenos.

Princípio de determinação:

AH Produzido após a hidroxidação catalítica da anilamina 4-aminofenóis, mais transformados em fenóis-O complexo, em 630 nm picos de absorção característicos; PassoSobremessado 630 nmtaxa de aumento da absorção, para calcularAHAtividade.

Kit de teste de atividade da anilina-4-hidroxidase (AH)

Composição:

Reagente 1: pó×1 garrafas,4℃Salvar. Inscrever-se antes da utilização 100ml Água destilada, totalmente dissolvida. Reagente 3: pó×1garrafas,4℃Salvar. Inscrever-se antes da utilização 10mlÁgua destilada, totalmente dissolvida. Reagente 4: pó×1garrafas,4℃Salvar. Inscrever-se antes da utilização 5 mlÁgua destilada, totalmente dissolvida.

Reagente 6: pó×1 garrafas (reagentes corrosivos),4℃Proteção contra a luz. Inscrever-se antes da utilização 10ml Água destilada, totalmente dissolvida. Reagente 7: pó×1garrafas,4℃Salvar. Inscrever-se antes da utilização 10mlA água destilada é completamente dissolvida.

Líquido padrão: líquido×1 garrafas,10μmol / L，4℃Proteção contra a luz.

Os parâmetros de um produto específico dependem dos parâmetros da descrição do produto recebida

Instrumentos e suprimentos próprios:

Centrífugas normais, centrífugas superrápidas, espectrofotômetros visíveis/Calibrador enzimático, vaso de comparação de vidro/96 Placa furada, vapor duplo e gelo.

Extração de líquido bruto:

1、Remover substâncias macromoleculares como núcleos celulares, mitocondrias e outros:Nome 0.5g Organização, Junte-se 1ml Reagente 1, moído completamente no gelo,10 000g 4℃，Centrífuga 30 minutosRemova o líquido limpo e transfira-o para um tubo centrífugo de alta velocidade.

2、Particulas grosseiras: 100 000g 4℃Centrífuga. 60 minutosElimine o líquido.

3、Eliminação de impurezas como hemoglobina:Passos para 2 Adicionado ao precipitado 1ml Reagente 1, dissolve completamente após a cobertura,100 000g Centrífuga 30 minutosAbandone.

Liquido limpo.

4、partículas finais:Passos para 3 Adicionando o Reagente II 0,5 mlA cobertura é totalmente dissolvida por choque, isto é, líquido enzimático grosso, a ser testado.

Operação de medição：

1. Espectrofotômetro/Preaquecimento do marcador enzimático 30 minAjustar o comprimento de onda para 630 nmA água destilada é zero.

2. O reagente 3 é colocado 37℃Preaquecimento no banho 30 minutos。

3. Reagente 5 colocado em banho de gelo pré-refrigerado 30 minutos。

4. Tubo padrão:取 0.5 ml EP Tubo, Junte-se 100μl líquido padrão,100μl Reagentes 6,100μl Reagente 7. Deixe em reposo a temperatura ambiente após a mistura. 30 minutos，Absorber 200 μlTraços de vidro/96placa de buraco,630 nmDeterminar a absorção de luz, comoAtubo padrão.

5. Tubo de controle:取 0.5 ml EP Tubo, Junte-se 50 μl líquido enzimático,100μl Reagentes 3,50 μl Água destilada, após mistura 37℃Aquecimento no banho 30 minutos；

Junte-se novamente 100μl Reagente 5, banho de gelo após mistura 5 minutos，11000rpm，4℃Centrífuga. 10 minutos；取 100μl Liquido limpo, adicionar novo 0.5 mlEP tubos; Junte-se novamente 100μl Reagentes 6,100μl Reagente 7. Deixe em reposo a temperatura ambiente após a mistura. 30 minutos- Sucção. 200 μl Traços de vidro/96 Buracoquadro,630 nmDeterminar a absorção de luz, como AControle do tubo.

6. Tubo de medição:取 0.5 ml EP Tubo, Junte-se 50 μl líquido enzimático,100μl Reagentes 3,50 μl Reagente 4, após mistura 37℃Aquecimento no banho 30 minutos；

Junte-se novamente 100μl Reagente 5, banho de gelo após mistura 5 minutos，11000rpm，4℃Centrífuga. 10 minutos；取 100μl Liquido limpo, adicionar novo 0.5 mlEP tubos; Junte-se novamente 100μl Reagentes 6,100μl Reagente 7. Deixe em reposo a temperatura ambiente após a mistura. 30 minutos- Sucção. 200 μl Traços de vidro/96 Buracoquadro,630 nmDeterminar a absorção de luz, como ATubo de medição.

AH Fórmula de cálculo de atividade：

a.A fórmula de cálculo para medição com uma placa de quartzo em traços é a seguinte:

（1）Calculado pela concentração de proteína

Definição de unidade ativa:37℃Produção catalítica por miligrama de proteína por minuto 1nmol 4-Os aminofenóis são 1 uma unidade enzimática.

AH Atividade(nmol/min/mg) prot) =C Produtos padrão× V Produtos padrão×（A Tubo de medição -A tubo de controle)÷A Tubo padrão×Múltiplo de diluição÷（Cpr × Vsemelhante)÷T

=2×（A Tubo de medição -A tubo de controle)÷A Tubo padrão÷Cpr。

（2）Calculado pela qualidade da amostra

Definição de unidade ativa:37℃Produção catalítica por grama de amostra por minuto 1nmol 4-Os aminofenóis são 1 uma unidade enzimática.

AHAtividade(nmol / min / g) Pesado)=C Produtos padrão× V Produtos padrão×（A Tubo de medição -A Tubo de controle）÷A Tubo padrão×Múltiplo de diluição÷(W×V) Tipo÷T

=2×（A Tubo de medição -A tubo de controle)÷A Tubo padrão÷W

CProdutos padrão:10μmol / L；VProdutos padrão:100μl = 1 × 10^-4LMúltiplos de diluição: Vcontra-geral÷Vlíquido superior= 300μl ÷ 100μl = 3；CPR: grossoConcentração de proteínas (em mg/ml）Necessita de medição adicional, recomendamos o uso da empresa BCA Kit de teste de teor de proteína;W Qualidade da amostra;Vamostra: adicionar o volume de líquido enzimático bruto no sistema de reação, 50 μl = 0,05 ml； TTempo de Reação Catalítica (min），30 minutos。

b.usar 96 A fórmula de cálculo para a medição da placa é a seguinte:

（1）Calculado pela concentração de proteína

Definição de unidade ativa:37℃Produção catalítica por miligrama de proteína por minuto 1nmol 4-Os aminofenóis são 1 uma unidade enzimática.

AH Atividade(nmol/min/mg) prot) =C Produtos padrão× V Produtos padrão×（A Tubo de medição -A tubo de controle)÷A Tubo padrão×Múltiplo de diluição÷（Cpr × Vsemelhante)÷T

=2×（A Tubo de medição -A tubo de controle)÷A Tubo padrão÷Cpr

（2）Calculado pela qualidade da amostra

Definição de unidade ativa:37℃Produção catalítica por grama de amostra por minuto 1nmol 4-Os aminofenóis são 1 uma unidade enzimática.

AH Atividade(nmol / min / g) Pesado) =C Produtos padrão× V Produtos padrão×（A Tubo de medição -A Tubo de controle）÷A Tubo padrão×Múltiplo de diluição÷(W×V) Tipo÷T

=2×（A Tubo de medição -A tubo de controle)÷A Tubo padrão÷W

C Produtos padrão:10μmol / L；V Produtos padrão:100μl = 1 × 10^-4LMúltiplos de diluição:V contra-geral÷Vlíquido superior= 300μl ÷ 100μl = 3；CPRConcentração de proteínas (em mg/ml），Necessita de medição adicional, recomendamos o uso da empresa BCA Kit de teste de teor de proteína; W Qualidade da amostra; Vamostra: adicionar o volume de líquido enzimático bruto no sistema de reação, 50 μl = 0,05 ml； TTempo de Reação Catalítica (min），30 minutos。

Kit de teste de atividade da anilina-4-hidroxidase (AH)