Citocromab5（citocromo b5）Kit de teste de conteúdo

Método Micrométrico 100T/96S

É necessário antes da determinação oficial 2-3 Uma amostra com maior diferença esperada para a previsãoDeterminação de significado:

CitocromaP450 Uma enzima é um grupo de isoenzimas que se encontram principalmente no fígado e desempenham um papel importante no metabolismo de substâncias estrangeiras, especialmente medicamentos e drogas.Metabolismo dos venenos. Citocroma P450 E citocromas.b5 simP450 As duas proteínas hemoglobinas do sistema enzimático, sua relação com a mudança P450 Metabolismo vivosexualmente intimamente relacionados.

Princípio de determinação:

Citrocroma oxidante b5 Após a restauração, em 424 nm com o pico máximo de absorção, por meio da medição 424 nm e 490 nm A diferença de valor de absorção pode ser calculadasairCitocromab5O conteúdo.

Kit de teste do teor de citocromo b5 Série P450

Composição:

Reagente 1: pó×2 garrafas,4℃Salvar. Antes da utilização 100ml Água destilada, totalmente dissolvida.

Preparação de fluido de trabalho:

Preparação pré-clínica, use luvas descartáveis, abra cuidadosamente a tampa da garrafa de três reagentes, acrescente o reagente dois 20 ml totalmente dissolvido,4℃Proteção contra a luz 1 Semana.

Os parâmetros de um produto específico dependem dos parâmetros da descrição do produto recebida

Instrumentos e suprimentos próprios:

Centrífuga comum, centrífuga de sobrevelocidade, pistola de pipeta ajustável, espectrofotômetro UV/Calibrador enzimático, vaso de comparação de vidro/96 Placa furada, e vaporÁgua destilada.

Citocroma na amostra b5 Extrair：

1、Remover substâncias macromoleculares como núcleos celulares, mitocondrias e outros:Nome 0.5g Organização, Junte-se 1ml Reagente 1, moído completamente no gelo,10 000g 4℃De longecoração 30 minutosRetire o líquido limpo e coloque-o em um tubo centrífugo de alta velocidade.

2、Particulas grosseiras:100 000g，4℃Centrífuga 60 minutosElimine o líquido.

3、Eliminação de impurezas como hemoglobina:Passos para 2 Adicionado ao precipitado 1ml Reagente 1, dissolve completamente após a cobertura,100 000g Centrífuga 30 minutosAbandone.Liquido limpo.

4、Liquido para teste:Passos para 3 Adicionando o Reagente II 0,5 mlDepois de fechar a tampa, dissolva-se completamente em choque, isto é, o líquido a ser testado deve ser medido no mesmo dia.

Citocroma b5 Operações de medição de conteúdo:

1. Espectrofotômetro/Preaquecimento do marcador enzimático 30 min。

2. O líquido de trabalho é colocado 25℃Preaquecimento no banho 30 min。

3. Tubo vazio:取 1ml Pratos de vidro, adicionado 10 μl Água destilada,200 μl Liquido de trabalho, à temperatura ambiente 2 min，424 nm e 490 nm Sugar.valor da luz,424 nm O valor de absorção éA Tubo em branco 1，490 nm O valor de absorção éA Tubo em branco 2。△A Tubo em branco=A Tubo em branco 1-A vazioTubo Branco 2

4. Tubo de medição:取 1ml Pratos de vidro, adicionado 10 μl Liquido para teste,200 μl Liquido de trabalho, à temperatura ambiente 2 min，424 nm e 490 nm Sugar.valor da luz,424 nm O valor de absorção éA Tubo de medição 1，490 nm O valor de absorção éA Tubo de medição 2。

△A Tubo de medição=A Tubo de medição 1-A Tubo de medição 2。

AtençãoBasta fazer um tubo vazio.

amostra de citocroma b5 Fórmula de cálculo de conteúdo:

a.A fórmula de cálculo para medição com uma placa de quartzo em traços é a seguinte:

（1）Calculado pela concentração de proteína

Citocromab5 Conteúdo(nmol/mg) prot) = (△A Tubo de medição-△A Tubo em branco÷(ε×d) ×V contra-geral÷（Cpr × V Tipo）

=122.8×(△A Tubo de medição-△A Tubo em branco÷Cpr

（2）Calculado pela qualidade da amostra

Citocromab5 Conteúdo (Nmol em g pesado)= (△A Tubo de medição-△A Tubo em branco÷(ε×d) ×V contra-geral×（V Geral÷V Tipo）÷W

=61.4×(△A Tubo de medição-△A Tubo em branco÷W

ε: Redução de citocromosb5 coeficiente de extinção de luz de Namur,171×10^-6 L / nmol / cm；d: Diâmetro do disco (centímetros），1cm； V Total: volume total do sistema de reação,210 μl = 2,1 × 10^-4 L；CPRConcentração de proteínas (em mg/mlrequerem medidas adicionais;VAmostra: adicionar o volume de líquido a medir no sistema de reação,10 μl = 0,01 ml；VTotal da amostra: volume total do líquido a ser testado,0,5 ml；WQualidade das amostras (g）。

b.usar 96 A fórmula de cálculo para a medição da placa é a seguinte:

（1）Calculado pela concentração de proteína

Citocromab5 Conteúdo(nmol/mg) prot) = (△A Tubo de medição-△A Tubo em branco÷(ε×d) ×V contra-geral÷（Cpr × V Tipo）

=245.6×(△A Tubo de medição-△A Tubo em branco÷Cpr

（2）Calculado pela qualidade da amostra

Citocromab5 Conteúdo (Nmol em g pesado)= (△A Tubo de medição-△A Tubo em branco÷(ε×d) ×V contra-geral×（V Geral÷V Tipo）÷W

=122.8×(△A Tubo de medição-△A Tubo em branco÷W

ε: Redução de citocromosb5 coeficiente de extinção de luz de Namur,171×10^-6 L / nmol / cm；d：96 Diâmetro do furo (centímetros），0,5 centímetros； V Total: volume total do sistema de reação,210 μl = 2,1 × 10^-4 L；CPRConcentração de proteínas (em mg/mlrequerem medidas adicionais;VAmostra: adicionar o volume de líquido a medir no sistema de reação,10 μl = 0,01 ml；VTotal da amostra: volume total do líquido a ser testado,0,5 ml；WQualidade das amostras (g）。

Kit de teste do teor de citocromo b5 Série P450