fosfatase ácida (ACP）Instruções do kit de teste de atividade

Método Micrométrico 100T/48S

É necessário antes da determinação oficial 2-3 Uma amostra com maior diferença esperada para a previsãoDeterminação de significado:

ACP A catalisação do fosfato monoéster em condições ácidas hidrodecompone o ácido fosfórico inorgânico, comumente encontrado em lysases de macrofagos.ACP É frequentemente usado para diagnóstico auxiliar de câncer de próstata.

Princípio de determinação:

Em ambiente ácido,ACP Hidrólise catalítica de nitrobenzofosfato de sódio 4-Nitro BenFenol, em405 nm absorção de luz característica; Passado pelo testefixo405 nmtaxa de aumento da absorção, para calcularACPAtividade.

Kit de teste de atividade da fosfatase ácida (ACP) Série esterase

Composição:

Instrumentos e suprimentos próprios:

marcadores enzimáticos,96 Placas furadas, centrífugas de mesa, panelas de banho, pipetas ajustáveis e água destilada.

Os parâmetros de um produto específico dependem dos parâmetros da descrição do produto recebida

Extração de líquido bruto:

1. Organização: de acordo com a qualidade da organização (g: um volume de reagente(ml)para 1：5~10 proporção (Sugerição de aproximação 0.1g Organização, Junte-se 1ml Reagentesa) tomar banho de gelo,4℃、10000gCentrífuga 10 minutosLeve o líquido para teste.

2. Bactérias ou células: por número de bactérias ou células (10⁴ p): um volume de reagente (ml）para 500~1000：1 proporção (Recomendações 500 Milhões.União de células 1ml Reagentes I), banho de gelo ultra-sônico de células quebradas (Potência 300wUltra-som. 3 Segundos, intervalo. 7 Segundos, tempo total 3 min）；E então... 10000g，4℃Centrífuga. 10 minutosColoque-o no gelo para teste.

3. O sangue pode ser medido diretamente ou depois de diluído adequadamente.

Determinação:

1. Preaquecimento do marcador enzimático 30 minAjustar o comprimento de onda para 405 nm。

2. em EP Adicione os seguintes reagentes ao tubo

Misturar, absorver. 200µL Inscrever 96 no buraco,405 nm Determine o valor de absorção de cada tubo.A = A Tubo de medição- A Controle do tubo.

Nota: Cada tubo de medição deve ser feito com um tubo de controle.

ACP Cálculo de atividade:

Curvas padrão y =7.3336x +0.0179；R² =0.9996；x Concentração padrão (molar/ml），y Para valor de absorçãoΔA。

1. No sangue.ACP Cálculo de Atividade

Definição de unidade ativa:30℃Produzido por milímetro de sangue por minuto 1μmol 4-O nitrobenfenol é definido como 1 uma unidade enzimática.

ACP 活力(μmol/min/ml) =（ΔA-0,0179）÷7.3336 × V contra-geral÷T÷V Tipo

= 0.4545 ×（ΔA -0.0179）

2. em tecidos, bactérias ou células ACP Cálculo de Atividade

（1）Calculado de acordo com a concentração de proteínas

Definição de unidade ativa:30℃Produção catalítica por miligrama de proteína por minuto 1 μmol 4-O nitrobenfenol é definido como 1 uma unidade enzimática.

ACP 活力(μmol/min/mg) prot)= (ΔA-0,0179)÷7,3336 ×V contra-geral÷T÷(V) Tipo×Cpr)

=0.4545 ×（ΔA-0,0179）÷Cpr

（2）Calculado de acordo com a qualidade da amostra

Definição de unidade ativa:30℃Produção catalítica por grama de tecido por minuto 1 μ molar 4-O nitrobenfenol é definido como 1 uma unidade enzimática.

ACP 活力 (μmol / min / g) Pesado) =(ΔA-0,0179) ÷ 7,3336 × V contra-geral÷T÷(W×V) Tipo÷V Geral)

= 0.4545 ×（ΔA -0.0179）÷W

（3）Calcular pelo número de bactérias ou células

Definição de unidade ativa:30℃cada 10⁴ uma bactéria ou célula a cada minuto 1 μ molar 4-O nitrobenfenol é definido como 1 uma unidade enzimática.

ACP 活力(μmol / min / 10)⁴ célula) = (ΔA-0,0179) ÷7,3336 × V contra-geral÷T÷(Número de células)× V Tipo÷V Geral）

=0.4545 ×（ΔA-0,0179）÷Número de células

VVolume total do sistema de reação (ml），1ml； W Qualidade da amostra,g； V Amostra: adicionar o volume da amostra ao sistema de reação（ml），

0,01 ml；V Total da amostra: volume de líquido extraído,1ml；TTempo de Reação (min），30 min；500o número total de células ou bactérias,500 Milhares.

Atenção:

ACP instável, especialmente no 37℃eO pH maior que 7 A perda de vitalidade é rápida sob as condições, portanto, as amostras de fosfatase ácida geralmente precisam ser preparadas no mesmo dia;Amostras de soro adicionadas a cada ml de soro 10 mgCitrato de hidrogênio de sódio ou 5 mgO sulfato de hidrogênio de sódio fazO pHBaixar para 6.5 abaixo, ou 5 mlSangue.Limpar Adição 30%Solução de ácido acético 2～3 gota, colocar em 4℃Salvável 1 Semana.

Kit de teste de atividade da fosfatase ácida (ACP) Série esterase