fosfatase alcalina (AKP/ALP）Instruções do kit de teste de atividade

Método Micrométrico 100T/48S

É necessário antes da determinação oficial 2-3 Uma amostra com maior diferença esperada para a previsãoDeterminação de significado:

AKP/ALP É uma glicoproteinase contendo zinco que hidroliza vários compostos fosfolipidos monoésteres naturais e sintéticos em ambientes alcalinos.

AKP/ALP É amplamente distribuído em todos os órgãos do corpo humano, principalmente no fígado.

Princípio de determinação:

Em ambiente alcalino,AKP/ALP catalisar o fosfato de benzo-disódio para gerar fenóis livres; fenóis e 4-Aminoantibilina e ferro cianhua potássio reação sub vermelhoDerivados de quinona, em 510nmabsorção de luz característica; Medidas 510 nmtaxa de aumento da absorção, para calculardo AKPAtividade.

Kit de teste de atividade de fosfatase alcalina Série de esterases

Composição:

Reagente 4: líquido×1 garrafas,4℃Proteção contra a luz, pode ser usada antes de se tornar azul-verde. Produto padrão: líquido×1 Filial (EP no tubo),2 molar/ml líquido fenólico padrão,4℃Salvar.

Instrumentos e suprimentos próprios:

Espectrofotômetro visível/Calibrador enzimático, traço de quartzo/96 Placas furadas, centrífugas de mesa, panelas de banho, pipetas ajustáveis e água destilada.

Os parâmetros de um produto específico dependem dos parâmetros da descrição do produto recebida

Extração de líquido bruto:

1. Organização: de acordo com a qualidade da organização (g: um volume de reagente(ml)para 1：5~10proporção (Sugerição de aproximação 0.1gOrganização, Junte-se 1mlReagentesa) tomar banho de gelo,4℃、8000gCentrífuga 10 minutosLeve o líquido para teste.

2. Bactérias ou células: por número de bactérias ou células (104 p): um volume de reagente (ml）para 500~1000：1 proporção (Recomendações 500 Milhões.União de células 1mlReagentes I), banho de gelo ultra-sônico de células quebradas (Potência 300wUltra-som. 3 Segundos, intervalo. 7 Segundos, tempo total 3 minutos）；E então... 8000g，4℃Centrífuga. 10 minutosColoque-o no gelo para teste.

3. O sangue pode ser medido diretamente ou depois de diluído adequadamente.

Etapas de medição:

1. Espectrofotômetro/Preaquecimento do marcador enzimático 30 minutosAjustar o comprimento de onda para 510 nmA água destilada é zero.

2. O reagente 3 é colocado 37℃Preaquecimento no banho 30 min。

3. Tubo vazio:取EP Tubo, Junte-se 4 μl Água destilada,40 μl Reagentes 2,40 μl Reagente 3, depois de misturar 37℃Aquecimento no banho 15 minutos；Adição de Reagentes 4 120 μlApós a mistura, 510nmDeterminar a absorção, comoATubo vazio.

4. Tubo padrão:取EP Tubo, Junte-se 4 μl produtos padrão,40 μl Reagentes 2,40 μl Reagente 3, depois de misturar 37℃Aquecimento no banho 15 minutos；

Adição de Reagentes 4 120 μlApós a mistura, 510nm Determinar a absorção, comoA tubo padrão.

5. Tubo de controle:取EP Tubo, Junte-se 4 μl líquido limpo,40 μl Água destilada,40 μl Reagente 3, depois de misturar 37℃Aquecimento no banho 15 minutos；Adição de Reagentes 4 120 μlApós a mistura, 510nmDeterminar a absorção, comoATubo de medição.

6. Tubo de medição:取EP Tubo, Junte-se 4 μl líquido limpo,40 μl Reagentes 2,40 μl Reagente 3, depois de misturar 37℃Aquecimento no banho 15 minutos；

Adição de Reagentes 4 120 μlApós a mistura, 510nm Determinar a absorção, comoA Tubo de medição.Onde o tubo padrão e o tubo vazio precisam ser feitos apenas um tubo, tubo de medição e tubo de controle para cada amostra.

Observação: Tubos vazios e tubos padrão são medidos apenas uma vez.

AKP/ALP Cálculo de atividade:

1. No sangue.AKP/ALP Cálculo de Vitalidade

Definição de unidade ativa:37℃Produzido por milímetro de sangue por minuto 1μmol O fenol é definido como 1 uma unidade enzimática.

AKP/ALP 活力(μmol/min) em ml)= [C] Produtos padrão×(A) Tubo de medição- A Tubo de controle÷(A) Tubo padrão- A Tubo em branco) × V contra-geral] ÷V Tipo

÷T=6,8×(A) Tubo de medição- A Tubo de controle÷(A) Tubo padrão- A Tubo em branco)

2. em tecidos, bactérias ou célulasAKP/ALP Cálculo de Atividade

（1）Calculado de acordo com a concentração de proteínas

Definição de unidade ativa:37℃Produção catalítica por miligrama de proteína por minuto 1 μmolarO fenol é definido como 1 uma unidade enzimática. AKP / ALP (μmol / min / mg) prot) =[C] Produtos padrão×(A) Tubo de medição- A Tubo de controle÷(A) Tubo padrão- A Tubo em branco) × V contra-geral]÷(Cpr×V)Tipo÷T = 6,8× (A)Tubo de medição- ATubo de controle÷(A)Tubo padrão- ATubo em branco÷Cpr

（2）Calculado de acordo com a qualidade da amostra

Definição de unidade ativa:37℃Produção catalítica por grama de tecido por minuto 1 μ molar O fenol é definido como 1 uma unidade enzimática.

AKP / ALP (μmol / min / g) Pesado)=[C Produtos padrão×(A) Tubo de medição- A Tubo de controle÷(A) Tubo padrão- A Tubo em branco) × V contra-geral] ÷ (W × V) Tipo÷VGeral÷T = 6,8× (A)Tubo de medição- ATubo de controle÷(A)Tubo padrão- ATubo em branco÷W

（3）Calcular pelo número de bactérias ou células

Definição de unidade ativa:37℃cada 10⁴ uma bactéria ou célula a cada minuto 1 μmolarO fenol é definido como 1 uma unidade enzimática.AKP/ALP (μmol/min/10)⁴ célula)=[C] Produtos padrão×(A) Tubo de medição- A Tubo de controle÷(A) Tubo padrão- A Tubo em branco) × V contra-geral]÷(Número de células× V Tipo÷V Geral÷T = 6,8× (A)Tubo de medição- ATubo de controle÷(A)Tubo padrão- ATubo em branco) ÷Número de células

C Produtos padrão:2μmol / ml；V Volume total do sistema de reação (ml），205μl = 0,205ml； CPRConcentração de proteínas líquidas（mg/ ml），Necessita de medição adicional, recomenda-se a utilização de produtos da empresa BCAKit de teste de teor de proteína;W Qualidade da amostra;VAmostra: Adicionando o volume de líquido superior ao sistema de reação (ml），0.004ml；VTotal da amostra: volume de líquido extraído,1 ml；TTempo de Reação (min），15 minutos。

Atenção:

1. Os reagentes 2, 3 e 4 devem ser mantidos à luz.

2. O reagente não pode mais ser usado depois de ficar azul-verde.

3. O reagente deve ser misturado imediatamente após a adição de quatro, caso contrário, a cor não aparecerá.todo。

Kit de teste de atividade de fosfatase alcalina Série de esterases