Instruções do Kit de Determinação do Conteúdo de Proteína por Bi-Ureia

Método Micrométrico 100T/96S

Nota: Escolha antes da medição formal 2-3 Uma amostra com grande diferença esperada é predita para garantir que a concentração de proteína 1 a 10 mg/ml ÁmbitoDentro.

Determinação de significado:

O teor de proteína solúvel da amostra é frequentemente usado para o cálculo da atividade enzimática. Além disso, o teor de proteína solúvel também é usado para análises de qualidade, como alimentos.

Princípio de determinação:

Em solução altamente alcalina, dual CuSO4 Formação de complexos roxos; A cor do complexo roxo é proporcional à concentração de proteínas.O peso molecular da proteína e a composição dos aminoácidos são independentes e podem ser usados ​​para determinar o conteúdo de proteína. O âmbito do método é 1 ~ 10mg Proteína, adequada para amostras com altas concentrações de proteínas, especialmente materiais animais.

Kit de teste de teor de proteína de dual-urea - em stock

Composição:

Produto padrão: líquido 1ml × 1 garrafas,5 mg/ml em 4°CSalvar.

Instrumentos e suprimentos próprios：

Centrífugas, espectrómetros visíveis/ Calibrador enzimático, traço de quartzo/96 Placas furadas, pipetas e água destilada.

Os parâmetros de um produto específico dependem dos parâmetros da descrição do produto recebida

Extração de proteínas solúveis em amostras:

1. amostras líquidas:Clarificar amostras de líquidos incolores pode ser medido diretamente.

2. amostras de organização:Qualidade organizacional (g): Volume de líquido extraído (ml)para 1：5~10 proporção (Sugerição de aproximação 0.1g Organização, Junte-se 1mlLiquido de extração (próprio, escolha tampão de extração enzimático ou água destilada ou água salina fisiológica conforme necessário)））

banho com gelo,8000g, 4 ℃Centrífuga 10min， Remova e aguarda o teste. As amostras de animais geralmente precisam ser diluídas.）

3 Bactérias, fungos: por número de células (104 pessoas)Volume de extração de líquido (em ml)para proporção de 500 a 1000:1Recomendações Cinco milhões de células.Inscrever 1ml extração líquida), banho de gelo ultra-sônico de células quebradas (Potência 300wUltra-som. 3 Segundos, intervalo. 7 Segundos, tempo total 3 minutos);E então... 8000g，

4℃Centrífuga. 10 minutosColoque-o no gelo para teste.

Operação de medição:

1. Espectrofotômetro/Preaquecimento do marcador enzimático 30 minAjustar o comprimento de onda para 540 nmA água destilada é zero.

2. Tubo vazio:取 0,5 milímetros EP Tubo, Junte-se 40 μl Água destilada,200 μl Reagente 1. Deixe em reposo a temperatura ambiente após a mistura. 15 min， 取 200 μl Em microquantidadePratos de vidro/96 placa de buraco,540 nm Por exemplo, lembre-seA Tubo vazio.

3. Tubo padrão:取 0,5 milímetros EP Tubo, Junte-se 40 μl líquido padrão,200 μl Reagente 1. Deixe em reposo a temperatura ambiente após a mistura. 15 min， 取 200 μl Traços de vidroPlaca de furo 96, 540 nmPor exemplo, lembre-se A tubulação padrão.

4. Tubo de medição:取 0,5 milímetros EP Tubo, Junte-se 40 μl Liquido para teste,200 μl Reagente 1. Deixe em reposo a temperatura ambiente após a mistura. 15 min， 取 200 μl Em microquantidadePratos de vidro/96 placa de buraco,540 nm Por exemplo, lembre-seA Tubo de medição.

Observação: Tubos vazios e tubos padrão são medidos apenas uma vez.

Fórmula de cálculo da concentração de proteína na amostra:

C para teste (em mg/ml)=C Tubo padrão×(A) Tubo de medição -A Tubo em branco÷(A) Tubo padrão -A Tubo em branco)

= 5× (A) Tubo de medição -A Tubo em branco÷(A) Tubo padrão -A Tubo em branco)

Precauções:

1. A concentração de proteína da amostra deve ser 1 a 10 mg/mlno âmbito, abaixo do 1mg / mlNão é possível usar esse método, mais do que 10 mg/ml deve ser diluído adequadamente. Assim, medirUtilização antecipada 1～2Faça um pré-experimento para garantir que a concentração de proteínas Entre 1 e 10 mg/ml.

2. Extração de proteínas das amostras a serem testadas com água salina fisiológica, vapor duplo ou sem proteínas PBS Extração. Esta lei está sujeita ao sulfato de amônio,Tris Interferença do tampão, levantarEssas substâncias não devem ser incluídas na extração; Caso contrário, altereKit de teste de conteúdo de proteína BCA.

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