Carboxilatase (CarE）Instruções do kit de teste de atividade

Método Micrométrico 100T/96S

É necessário antes da determinação oficial 2-3 Uma amostra com maior diferença esperada para a previsãoDeterminação de significado:

MamíferosCarETambém conhecida como lipoesterase (aliesteraseÉ amplamente distribuída em tecidos e órgãos e pertence à família das hidrolisases do ácido sílico.CarECatalisa a hidrolise de substâncias endógenas e exógenas que contêm ligações éster, amida e sulféster, mas não catalisa a hidrolise de bases acetil e seus análogos.CarE Participando no transporte lipídico e no metabolismo, e associado à desintoxicação e ao metabolismo de vários medicamentos, venenos ambientais e carcinógenos, os pesticidas de fosforo orgânico podem se ligar eSupressãoCarEAtividade.

Princípio de determinação:

CarE Capaz de catalisar o ácido acético-1-Nafetéridos geram nafésteres, cor da cesta sólida; em 450 nm Taxa de aumento da absorção de luz, cálculoCarE Atividade.

Kit de teste de atividade da carboxilesterase (CarE)

Composição:

Reagente 3: pó×2 Branco, 4℃Salvar, retirar antes da utilização 1 Reagentes 3, mais 0,6 ml etanol sem água totalmente dissolvido; Reagente 4: pó×2Branco,-20℃Salvar, retirar antes da utilização 1 Reagente de apoio 4, adicionar uma pequena quantidade de reagente 2 dissolvido;

Preparação de fluido de trabalho: preparação pré-uso, para 1 No segundo reagente da garrafa, adicione o terceiro reagente dissolvido e o quarto reagente. 1 ramo, totalmente dissolvido, filtrado,4℃Proteção contra a luz, disponível 1 Semana.

Os parâmetros de um produto específico dependem dos parâmetros da descrição do produto recebida

Instrumentos e suprimentos próprios:

Espectrofotômetro visível, centrífuga de mesa, pipeta ajustável,1 ml O vidro é comparado a vasos ceróticos, talhas, gelo e água destilada.

Extração de líquido bruto:

Preparação de amostras de bactérias e células

Recolher bactérias ou células dentro de um tubo de centrifugação e descartar depois de centrifugar; De acordo com cada 200 Milhões de bactérias ou células adicionadas 400 μl Reagentes 1, ultra-som quebra bactérias ou células (Potência 20Percentagem, ultra-som 3sO intervalo. 10 anosRepita. 30 segundo);12000g 4 ℃Centrífuga 30 minutosLeve o líquido para teste.

2Organização: de acordo com a qualidade da organizaçãog: um volume de reagente(ml)para 1：5~10 proporção (Sugerição de aproximação 0.1g Organização, Junte-se 1ml 1) Realizar banho de gelo homogêneo;12000g 4 ℃Centrífuga 30 minutosLeve o líquido para teste.

3Liquidos: Determinação direta

Operação de medição:

1. Espectrofotômetro/Preaquecimento do marcador enzimático 30 minutosAjustar o comprimento de onda para 450 nmA água destilada é zero.

2. O Reagente 2 é colocado 37℃Preaquecimento no banho 30 min。

3. Tubo vazio:Leve traços de vidro/96 Placa de buraco, adicionar em seguida 5 μl Água destilada e 200 μl Reagentes 2, misturar rapidamente, 450 nm Detecçãofixo 3 minutosAlterações no valor de absorção interna, 10 anosValor de absorção éA1， 第 190sValor de absorção éA2。△ATubo em branco= A2-A1

4. Tubo de medição:Leve traços de vidro/96 Placa de buraco, adicionar em seguida 5 μl líquido e 200 μl Reagentes 2, misturar rapidamente, 450 nm Detecção

fixo 3 minutos Alterações no valor de absorção interna, 10 anos Valor de absorção éA3， 第 190s Valor de absorção éA4。△A Tubo de medição=A4-A3

Observação: o tubo vazio só deve ser medido uma vez.

CarE Fórmula de cálculo de atividade:

a.A fórmula de cálculo para medição com uma placa de quartzo em traços é a seguinte:

1na organizaçãoCarE Atividade

（1）Calculado pela concentração de proteína

CarE Definição de unidade ativa: cadaem mg As proteínas do tecido 37℃Aumento da absorção catalítica por minuto no sistema de reação 1 Definido como 1 uma unidade enzimática.

CarE Actividade enzimática(U/mg) prot)= (△A Tubo de medição-△A Tubo em branco)× V contra-geral÷(Cpr×V) Tipo÷T

=13.67×(△A Tubo de medição-△A Tubo em branco÷Cpr

（2）Calculado pelo peso da amostra

CarE Definição de unidade ativa: cadag Organização em 37℃Aumento da absorção catalítica por minuto no sistema de reação 1 Definido como 1 uma unidade enzimática.

CarE Actividade enzimática(U/g) Pesado)= (△A Tubo de medição-△A Tubo em branco)× V contra-geral×（V Geral÷V Tipo）÷W÷T

=13.67×(△A Tubo de medição-△A Tubo em branco÷W 2bactérias ou células.CarEAtividade

CarE Definição de unidade ativa: cada 1 milhares de células ou bactérias. 37℃Aumento da absorção catalítica por minuto no sistema de reação 1 Definido como umCarE Viver

unidade sexual.

CarE Actividade enzimática(U/10⁴ célula)= (△A Tubo de medição-△A Tubo em branco) ×V contra-geral×（V Geral÷V semelhante)÷densidade celular)10⁴ célula/ml）

÷T=13,67×(△A Tubo de medição-△A Tubo em branco)÷densidade celular)10⁴ célula/ml） 3Em líquidoCarEAtividade

CarE Definição de unidade ativa: por ml de amostra em 37℃Aumento da absorção catalítica por minuto no sistema de reação 1 Definido como 1 uma unidade enzimática.

CarE Actividade enzimática(U/ml) )= (△A Tubo de medição-△A Tubo em branco)× V contra-geral÷V Tipo÷T

=13.67×(△A Tubo de medição-△A Tubo em branco)

V Total: volume total do sistema de reação,205μl = 2,05 × 10^-4L；V Total da amostra: volume total do líquido superior,1 ml；V Amostra: Adicionar o volume de líquido(ml)，

0.005 ml；CPRConcentração de proteínas,em mg/ml；WQualidade das amostras (g）；TTempo de Reação (min），3 minutos。

b.usar 96 A fórmula de cálculo para a medição da placa é a seguinte:

1na organizaçãoCarE Atividade

（3）Calculado pela concentração de proteína

CarE Definição de unidade ativa: cadaem mg As proteínas do tecido 37℃Aumento da absorção catalítica por minuto no sistema de reação 1 Definido como 1 uma unidade enzimática.

CarE Actividade enzimática(U/mg) prot)= (△A Tubo de medição-△A Tubo em branco)× V contra-geral÷(Cpr×V) Tipo÷T

=13.67×(△A Tubo de medição-△A Tubo em branco÷Cpr

（4）Calculado pelo peso da amostra

CarE Definição de unidade ativa: cadag Organização em 37℃Aumento da absorção catalítica por minuto no sistema de reação 1 Definido como 1 uma unidade enzimática.

CarE Actividade enzimática(U/g) Pesado)= (△A Tubo de medição-△A Tubo em branco) ×V contra-geral×（V Geral÷V Tipo）÷W÷T

=13.67×(△A Tubo de medição-△A Tubo em branco÷W 2bactérias ou células.CarEAtividade

CarE Definição de unidade ativa: cada 1 milhares de células ou bactérias. 37℃Aumento da absorção catalítica por minuto no sistema de reação 1 Definido como umCarE Viver

unidade sexual.

CarE Actividade enzimática(U/10⁴ célula)= (△A Tubo de medição-△A Tubo em branco)× V contra-geral×（V Geral÷V semelhante)÷densidade celular)10⁴ célula/ml）

÷T=13,67×(△A Tubo de medição-△A Tubo em branco)÷densidade celular)10⁴ célula/ml）

3. Em líquidoCarE Atividade

CarE Definição de unidade ativa: por ml de amostra em 37℃Aumento da absorção catalítica por minuto no sistema de reação 1 Definido como 1 uma unidade enzimática.

CarE Actividade enzimática(U/ml) )= (△A Tubo de medição-△A Tubo em branco)× V contra-geral÷V Tipo÷T

=13.67×(△A Tubo de medição-△A Tubo em branco)

V Total: volume total do sistema de reação,205μl = 2,05 × 10^-4L；V Total da amostra: volume total do líquido superior,1 ml；V Amostra: Adicionar o volume de líquido(ml)，

0.005 ml；CPRConcentração de proteínas,em mg/ml；WQualidade das amostras (g）；TTempo de Reação (min），3 minutos。

Kit de teste de atividade da carboxilesterase (CarE)